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南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus, SRBSDV)为呼肠孤病毒科(Reoviridae)斐济病毒属(Fijivirus)第2组的一个建议新种。主要由白背飞虱(Sogatella furcifera)以持久性不经卵方式传播,侵染水稻、玉米等引起南方水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病。疑似病株的田间诊断及白背飞虱带毒率测定是病害流行预测的重要因子。当前常用的方法,如生物学方法、免疫学方法、分子生物学方法,存在耗时长、操作复杂及成本高等缺陷,难以满足快速、准确、低成本的检测要求,也不能实现病毒RNA拷贝数的定量。另外,感染SRBSDV的水稻植株与水稻黑条矮缩病表现类似症状,且在基因组序列、病毒粒体形态、症状、寄主范围、传毒介体及血清学等方面也非常相似,传统检测方法很难将它们区分。有必要建立适用于不同要求和场所的检测方法来满足实际需求。为了满足快速、简便、低成本、高特异的要求,本研究建立了逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP).针对SRBSDV S9核苷酸序列保守区域设计4条LAMP特异性引物(F3,B3,FIP,BIP),从引物浓度、MgSO4浓度及反应温度、时间几个方面对RT-LAMP方法进行优化。确定引物浓度比为1：8(F3/B3终浓度0.2μM, FIP/BIP终浓度1.6μM), MgSO4终浓度8mM,60-62℃恒温反应60min为适宜实验条件。本RT-LAMP方法的灵敏性是RT-PCR方法的10倍,能够排除RBSDV的干扰而特异的检测SRBSDV,适合寄主植物和介体体内SRBSDV的快速检测。为了实现病毒RNA拷贝数的准确定量,本研究建立了Real time RT-PCR检测方法。根据SRBSDV S9核苷酸序列的保守区域设计2条特异性引物(SRBSDV-S9-F和SRBSDV-S9-R).制备重组质粒pGEM-T easy-S9,通过体外转录与纯化制备RNA标准品。优化引物浓度、退火-延伸温度,确定引物终浓度为300nM,退火-延伸温度60.0℃。体外转录获得的RNA标准品经10倍系列梯度稀释,制作标准曲线,进一步测定扩增产物的溶解温度获得熔点曲线。标准曲线的R2为0.996,扩增效率为100.2%,熔点曲线峰单一尖锐,说明扩增产物单一,特异性强。灵敏性测验发现该方法灵敏性高,比常规RT-PCR方法高100倍,可实际应用于病毒拷贝数的准确定量,为SRBSDV的致病机制、分子生物学研究等奠定了基础。为评价SRBSDV几种检测方法的适用范围,本文对RT-LAMP, RT-PCR, Real time RT-PCR以及DIBA四种检测方法的特异性、灵敏性、检测时间等方面进行比较研究。表明,RT-LAMP方法适用于植物和昆虫介体内SRBSDV的快速、准确诊断,尤其适用于基层植保部门的快速检测；Real time RT-PCR方法能够准确定量病株内SRBSDVRNA拷贝数；DIBA法适用于白背飞虱和灰飞虱群体带毒率的测定,为室内传毒实验及田间带毒率测定提供了一种方法。