M1/M2型巨噬细胞在大鼠骨骼肌损伤时间推断中的应用

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目的:研究大鼠骨骼肌挫伤后细胞形态的变化规律,对损伤区域进行鉴别,根据损伤后M1/M2型巨噬细胞的动态变化及浸润趋势建立损伤时间推断方法。方法:建立大鼠右后肢骨骼肌挫伤模型,设立对照组和实验组,实验组包括挫伤后6h、12h、1d、1.5d、2d、2.5d、3d、4d、6d、9d、14d组,采用HE染色方法观察各时间点骨骼肌的损伤、修复规律,运用全景组织细胞定量分析系统检测损伤区内单位面积肌细胞数量及横截面积变化,肌细胞形态变化(周长,圆润度),细胞核数量变化等。用免疫荧光多重染色方法检测各组大鼠骨骼肌组织内MI及M2型巨噬细胞数量变化规律。统计分析损伤组与对照组差异,根据细胞形态学指标鉴别损伤区域。分析M1/M2型巨噬细胞在损伤区动态表达数量比率,建立与损伤时间的关系。结果:大鼠骨骼肌挫伤后在0.5mm×0.5mm范围内肌纤维圆润度小于0.73±0.16,肌细胞核数量大于165.8±28.3个/0.25mm~2时,可以认为该区域为损伤区域。在0.5mm×0.5mm范围内,M1型巨噬细胞比率在0.05±0.02~0.18±0.12且M2型巨噬细胞比率在0.02±0.01~0.04±0.02范围内时,推断该组织的损伤时间为伤后6h-2d;M1型巨噬细胞比率0.22±0.02且M2型巨噬细胞比率在0.09±0.02范围内时,推断该组织的损伤时间为损伤后2.5d;M1型巨噬细胞比率0.1±0.02且M2型巨噬细胞比率在0.16±0.07范围内时,推断该组织的损伤时间为损伤后6d;M1型巨噬细胞比率0.05±0.01~0.09±0.02且M2型巨噬细胞比率在0.07±0.02~0.09±0.01范围内时,推断该组织的损伤时间为损伤后9-14d。结论:大鼠骨骼肌挫伤后,部分肌细胞形态学特征可用于损伤区域的识别,M1/M2型巨噬细胞随时间变化表达规律可作为损伤时间推断的新依据,进一步提高损伤时间推断的准确性。
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