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目的 建立小鼠淋巴瘤的原位脑肿瘤模型及血脑屏障(血脑肿瘤屏障)体外模型，研究PDE5抑制剂对脑部恶性肿瘤的化疗疗效影响，以及对血脑肿瘤屏障及正常血脑屏障通透性的影响，研究其分子机制，为提高脑部恶性肿瘤的化疗疗效提供新的方向和理论依据。 方法 体内试验： 1、建立小鼠淋巴瘤的原位脑肿瘤模型 2、通过小鼠脑恶性肿瘤模型评估PDE5抑制剂对血脑肿瘤屏障的开放作用(采用示踪剂和检测药物浓度方法) 1)采用示踪剂Evan’s Blue，比较PDE5抑制剂使用后，是否增加脑肿瘤中的浓度。 2)采用氨甲喋呤药物浓度检测，比较PDE5抑制剂使用后，是否增加脑肿瘤中的浓度。 3、电镜下小鼠血脑屏障中的超微结构改变 体外实验 1、小鼠脑微血管内皮细胞培养 2、Transwell系统共培养(脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞)的血脑屏障体外实验模型 3、荧光标记的利妥昔单抗(FITC-Rituximab)通透性实验 荧光分光光度计法测定BMECs细胞内转运的荧光标记的利妥昔单抗(FITC-Rituximab)含量。 临床标本： 1、研究原发和转移恶性脑肿瘤PDE5表达情况 1)免疫组化法检测PDE5表达。 2)Western-Blot法检测PDE5表达。 结果 1.免疫组化及病理显示成功种植淋巴瘤，种植后小鼠体重变化情况及存活时间恒定有规律，该方法建立的脑淋巴瘤动物模型在组织病理学上接近人脑淋巴瘤，且颅内生长稳定。成功率为80％。未见颅外转移病灶，实验周期短，重复性较好。 2.依文思蓝通透性检测示：他达拉非组脑淋巴瘤血管通透性明显增加(P<0.05)。氨甲喋呤在他达拉非组脑肿瘤组织中浓度增加近1.8倍(P<0.05)，而非用药肿瘤组织和正常组织中药物浓度无差异。电镜观察：他达拉非组小鼠脑微血管内皮细胞内有大量微囊液泡。 3.原代星形胶质细胞GFAP阳性，CD34阴性，原代小鼠血管内皮细胞CD34弱阳性，GFAP阴性。在脑微血管内皮细胞对于荧光标记利妥昔单抗的内吞实验中，给予他达拉非后，共培养的血管内皮细胞荧光量未有差异(p>0.05)。单独培养的血管内皮细胞给予他达拉非后，荧光分光光度法测得荧光量增加1.4倍(P<0.05)。 4.与正常脑组织标本相比，PDE5在人脑恶性肘-瘤组织标本中存在明显高表达，并与肿瘤性质相关，结果具有统计学差异(p<0.05)。 结论 1、外源性植入同源小鼠A20的B淋巴瘤，可在小鼠大脑中形成原位肿瘤，其形态及恶性程度符合脑淋巴瘤模型的要求，生长特性及病理特征与人脑淋巴瘤相似，可作为临床淋巴瘤基础研究的理想模型。 2、5型磷酸二酯酶抑制剂可以特异性显著增加小鼠脑淋巴瘤微血管的通透性，可能和微血管内皮细胞内微囊液泡数量增加有关。 3、他达拉非可增加脑肿瘤血管内皮细胞对大分子药物的通透性，同时不增加正常血脑屏障的通透性。 4、PDE5在正常脑组织和脑恶性肿瘤中的表达差异可能是PDE5抑制剂选择性开放血脑屏障的物质基础，并且PDE5的表达水平与人脑恶性肿瘤类别相关。