二花脸和皮特兰两品种仔猪心脏和肾脏的运输应激性损伤与Hsp70相关性研究

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随着集约化养猪业的发展以及国外一些瘦肉型应激敏感猪的引进,猪的运输导致的损失越来越明显,热休克蛋白70是热休克蛋白家族中最重要的一类家族成员,它在应激过程中发挥重要作用,具有“分子伴侣”、细胞保护、抗凋亡以及肿瘤免疫治疗等独特复杂的生物学功能,它的研究已成为生命科学领域研究的热点之一。本课题通过建立运输应激模型,选取具有代表性的心脏和肾脏两个组织,研究不同品种仔猪运输应激损伤与热休克蛋白70及其mRNA之间的相关性,探讨不同品种仔猪运输应激保护,为选育抗应激品种提供依据。AST、ALT、CK、T3、T4、Insulin以及Cortisol被用来衡量组织的损伤程度以及基础代谢水平的变化。在连续切片上分别采用HE、免疫组化以及原位杂交技术显示组织变化,热休克蛋白70及其mRNA的定位,Western blot以及FQ RT-PCR用来对热休克蛋白70及其mRNA进行定量。外周血清酶以及激素测定结果显示:两种品种仔猪运输应激后AST的含量皆显著高于对照组(p<0.05);运输组二花脸仔猪CK的含量显著高于对照组(p<0.05),而皮特兰仔猪CK含量极显著高于对照组(p<0.01);二花脸仔猪在运输前后T3含量没有显著性差异,但是对照组皮特兰仔猪血清T3含量显著高于运输组;两个品种猪在运输前后血液中的ALT、T4、Insulin以及Cortisol没有显著性的差异。HE染色结果显示两种品种仔猪在运输后心脏和肾脏均显示不同程度的损伤。免疫组化以及原位杂交染色结果在组织细胞没有明显损伤和损伤比较轻微的部位热休克蛋白70阳性信号明显强于其他部位,并且在这些部位Hsp70 mRNA的表达信号也明显强于其他部位。不同品种仔猪在运输后均表现出不同程度的损伤,Hsp70以及Hsp70 mRNA表现出相似的分布,其中二花脸仔猪更明显的表现出应激保护和Hsp70分布的特异性。Western blot以及FQ RT-PCR结果显示:在心脏和肾脏中,运输组二花脸仔猪热休克蛋白70的含量显著高于对照组(p<0.05),但是mRNA含量虽然升高,但是没有显著性差异;运输组皮特兰仔猪蛋白虽然含量高于对照组,但是差异不显著,但是mRNA的含量显著高于对照组(p<0.05)。并且研究发现对照组中二花脸仔猪Hsp70 mRNA的含量显著高于皮特兰仔猪(p<0.05)。由血液生化指标我们可以看出运输应激都能够引起二花脸和皮特兰仔猪的应激损伤,并且皮特兰仔猪损伤表现更明显。组织损伤观察以及Hsp70及其mRNA的定位我们可以观察到在Hsp70及其mRNA阳性信号比较强的区域组织细胞相对比较完整,我们可以推断Hsp70发挥了应激保护作用。蛋白定量技术显示二花脸仔猪仔运输后能够迅速产生Hsp70发挥保护作用,而皮特兰虽然中Hsp70虽然升高,但是不明显,说明二花脸仔猪的应激保护性比较好,而这种Hsp70的迅速翻译与二花脸基础水平高表达Hsp70 mRNA应该具有一定的相关性。在Hsp70 mRNA的定量检测中发现,Hsp70在对照组二花脸仔猪中的表达高于皮特兰(p<0.05),而皮特兰仔猪在进行了两小时运输后,虽然升高了Hsp70mRNA的含量,但是Hsp70的表达量却没有明显的升高,由此我们可以比较皮特兰和二花脸仔猪的应激敏感度和Hsp70表达之间的相关性,可以在选育抗应激品种方面提供一些参考。
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