人羊膜上皮细胞移植治疗肝硬化大鼠的初步研究

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目的:观察羊膜上皮细胞在正常免疫大鼠体内存活、迁徙及对大鼠肝硬化的治疗作用,拟为人羊膜上皮细胞应用于肝硬化治疗提供实验理论。方法:参照文献提取羊膜上皮细胞并检测细胞总数、存活率及纯度,检测冰冻复苏前后细胞数及存活率。80只SD大鼠,完全随机设计分五组,移植4×106细胞约0.4ml悬浮液1周为A组,移植等量细胞悬浮液2周为B组,移植等量生理盐水为C组,肝硬化组为D组,空白对照组为E。参照预实验诱导肝硬化模型,通过脾实质移植首次将羊膜上皮细胞注入正常免疫大鼠模型内,通过检测A、B两组大鼠模型各脏器中人类特有Alu基因重复序列和白细胞抗原G是否存在及阳性脏器率的差异,观察细胞在体内的存活和各脏器中迁徙情况;形态学观察各组脏器;对B、C、D组肝脏行组织学HE染色,采用Chevallier肝纤维化组织学半定量计分系统分析大鼠肝硬化程度;采用免疫组化评分系统半定量检测B、C、D、E组肝脏中TGF-β1的表达;血清生化仪定量分析B、C、D、 E组血清中AST、ALT、ALB水平。结果:本实验提取羊膜上皮细胞数平均约为1.1×108/胎盘,存活率及纯度分别为84%和91%,冻存复苏后的细胞数和存活率较前无明显降低,细胞可用于实验研究。经脾实质移植羊膜上皮细胞入完全免疫大鼠体内,可于部分心、肝、肺、肾和脑中检测到Alu基因重复序列及HLA-G的存在,且B组中肝脏比其余各脏器的阳性脏器率高,P均<0.05;B组Chevallier评分比其余各组低,P均<0.05;B组TGF-β1免疫组化评分较对照组减小,P均<0.05;B组血清ALT、AST、 ALB较对照组改善,P均<0.05。结论:1.首次证实羊膜上皮细胞可在正常免疫大鼠体内存活,并可迁徙至肝、心、脑、肺和肾等脏器,其中肝脏的迁徙最多;2.羊膜上皮细胞移植可缓解大鼠肝硬化模型的肝硬化程度并改善血清肝功能。图10幅,表6个,参考文献70篇。
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