消瘿导痰汤通过调控Treg/Th17细胞治疗桥本甲状腺炎的临床疗效及机制研究

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wfljk
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目的:桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)是自身免疫性甲状腺炎的经典代表,发病率逐年上升,研究证实Notch信号通路可通过调控Treg/Th17细胞因子水平参与到多种自身免疫性疾病发生发展过程中,Notch蛋白同样可能通过影响Treg/Th17细胞因子水平促进桥本甲状腺炎的发生发展。因此,笔者开展临床试验观察消瘿导痰汤的临床疗效,制造桥本甲状腺炎小鼠模型、诱导甲状腺炎性细胞株,通过对Notch蛋白表达、Treg/Th17细胞因子的检测,探索中药消瘿导痰汤对本病的作用机制,为其临床运用提供科学依据。方法:收集符合纳入条件的桥本甲状腺炎气滞痰凝证患者共66例,观察中药消瘿导痰汤的临床疗效,分别于治疗前、中、后对患者进行中医症状评分,于治疗前后用ELISA法检测各组患者血清甲状腺功能、Notch蛋白表达情况、Treg/Th17细胞因子水平,于治疗前后分别行一次甲状腺超声检查。制造桥本甲状腺炎小鼠模型,于治疗结束后用ELISA法检测小鼠血清甲状腺功能、Notch蛋白表达及Treg/Th17细胞因子水平。诱导甲状腺炎性细胞株,采用中药消瘿导痰汤含药血清作用于细胞,培养结束后用Real-time qPCR以及Western blot法检测各组细胞基因中Notch蛋白表达情况,用ELISA法检测各组Treg/Th17细胞因子及炎症因子水平。结果:1、临床试验结果:从中医证候疗效及疾病疗效来看,治疗组优于对照组,统计学差异显著(P<0.001);HT患者血清Notch蛋白表达水平较健康人群明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.001);治疗组患者治疗后血清Notch蛋白表达水平较对照组明显下降,差异具有显著统计学意义(P<0.001);治疗组患者治疗后血清Treg细胞关键活化蛋白水平均较治疗前上调,差异具有统计学意义(P<0.05),组间比较,治疗组治疗后血清FOX-P3水平较对照组明显上升(P<0.05),但两组TGF-β、IL-10水平无统计学差异(P>0.05);治疗组患者治疗后血清Th17细胞关键活化蛋白STAT3、IL-17、IL-22水平均较治疗前下调,差异具有统计学意义(P<0.05),组间比较,治疗组STAT3、IL-17水平较对照组明显下调(P<0.05),但两组RORγt、IL-22水平无统计学差异(P>0.05);在治疗中期,治疗组较对照组TSH下降幅度更显著,具有统计学差异(P<0.05),但治疗后两组TSH水平无统计学差异(P>0.05);治疗组患者治疗后血清TPOAb水平下降幅度较对照组明显(P<0.05),但是两组患者FT3、FT4、TGAb水平比较,无统计学差异(P>0.05)。2、动物实验结果:与模型组比较,西药对照组、中药低剂量组、中药高剂量组及Notch蛋白抑制剂组小鼠血清TSH均明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);其余各组小鼠与模型组比较,血清FT3、FT4无明显变化,TGAb、TPOAb无明显下降,差异无统计学意义(P>0.05);模型组小鼠血清Notch蛋白表达情况较其余各组均明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.001);中药高剂量组与西药对照组、中药低剂量组、模型组比较,小鼠血清Treg细胞关键活化蛋白FOX-P3水平明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05);中药3组与Notch蛋白抑制组较模型组及西药组小鼠血清TGF-β水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);各组小鼠血清IL-10水平比较,无统计学差异(P>0.05);各组小鼠血清Th17细胞关键活化蛋白水平与模型组比较,其余各组小鼠血清STAT3、RORyt、IL-22 水平均明显下降,具有统计学差异(P<0.05);小鼠血清IL-17水平组间比较,无统计学差异(p>0.05)。3、细胞实验结果:5组甲状腺炎性细胞基因中Notch蛋白表达水平比较,iNotch+DS组、DS组与其余三组比较,甲状腺炎性细胞基因中Notch蛋白的β-actin值均明显下调,具有统计学差异(P<0.05);细胞上清液中Treg细胞关键活化蛋白FOX-P3、TGF-β、IL-10水平两两比较,iNotch+DS组、DS组与其余三组比较,Treg细胞关键活化蛋白明显上调,具有显著统计学差异(P<0.001);细胞上清液中Th17细胞关键活化蛋白STAT3、IL-17、IL-22水平两两比较,iNotch组、iNotch+DS组、DS组较Blank组、NC组明显下调,统计学差异显著(P<0.001),但RORyt水平组间比较,无统计学差异(P>0.05);细胞上清液中炎症因子水平两两比较,iNotch组、iNotch+DS组、DS组细胞上清液中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6较Blank组、NC组明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);iNotch+DS组细胞上清液中炎症因子COX-2水平较NC组明显下调,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞上清液中炎症因子IL-8水平两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:中药消瘿导痰汤对气滞痰凝证HT患者及HT小鼠模型均具有显著的治疗疗效,其机制可能通过调控Notch蛋白通路介导Treg/Th17细胞轴的免疫炎症反应有关。
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