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鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease, IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)引起的禽的一种急性高度接触性传染病,该病以法氏囊损伤和免疫抑制为特征。IBDV的基因组包含3个开放阅读框,编码VP1、VP2、VP3、VP4、VP5共5种病毒蛋白。其中,结构蛋白VP2是病毒粒子衣壳结构的主要成分,它影响宿主细胞嗜性、病毒遗传变异以及诱发细胞自噬。VP2是首个被证实可以引起宿主细胞以及多种哺乳动物细胞凋亡的IBDV相关蛋白,长期以来一直引起关注。然而,目前对于VP2诱导细胞凋亡的分子机理仍然不清楚。本研究重点探索VP2诱导细胞凋亡的分子机理,寻找IBDV VP2蛋白在宿主细胞凋亡信号通路中所作用的靶蛋白,探索VP2诱导细胞凋亡的分子机制。利用酵母双杂交技术,以VP2为诱饵蛋白,从法氏囊cDNA文库中筛选到了与VP2结合的宿主抗凋亡蛋白oral cancer overexpressed 1 (ORAOV1)。应用免疫共沉淀及激光共聚焦技术进一步确证了 VP2与ORAOV1之间的互作关系。此外,利用RNA干扰技术沉默ORAOV1的表达后发现,降低ORAOV1蛋白的表达水平能够直接引起Hela细胞或者DF-1细胞凋亡,从而证实ORAOV1的功能与细胞凋亡有关,是一种抗细胞凋亡的分子。然后,我们发现VP2转染或者IBDV感染能够引起ORAOV1蛋白降解并且引起明显的细胞凋亡,并检测到引起细胞凋亡的关键蛋白酶Caspase-3及其底物PARP的剪切。与此同时,VP2诱导细胞凋亡程度与ORAOV1蛋白减少呈正相关。进一步研究发现,在细胞中瞬时表达ORAOVI蛋白可以抑制VP2或IBDV病毒感染诱发的细胞凋亡,而且上调表达ORAOV1后可以减少病毒粒子在感染早期的释放。在细胞培养液中加入泛素-蛋白酶降解途径抑制剂MG132之后,不能抑制瞬时转染VP2或者感染IBDV造成的ORAOV1降解,同时也没有检测到ORAOV1蛋白发生多聚泛素化,说明VP2降解ORAOV1蛋白与泛素-蛋白酶途径无关。深入研究发现,纯化的VP2蛋白可以直接降解细胞裂解液中的ORAOV1蛋白或者纯化的ORAOV1蛋白,说明VP2蛋白作为蛋白酶直接降解ORAOV1蛋白。本研究基于VP2的截短表达体与ORAOV1的相互作用研究,确定了 VP2蛋白羧基端恒定区的第331-452位氨基酸是引起VP2与ORAOV1的结合并导致ORAOV11降解的关键功能域。综上所述,本研究发现IBDV VP2在细胞中可能具有蛋白酶活性,结合并降解细胞中的凋亡相关蛋白ORAOV引起细胞凋亡,并且在感染早期促进IBDV扩散。ORAOV1是IBDV VP2直接作用的靶蛋白,在VP2引起的细胞凋亡的过程中扮演了重要的角色。本研究结果为阐明IBDV的致病机制提供了重要依据,也为IBDV VP2相关疫苗的研发提供了参考。