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目的:本研究通过双侧颈总动脉结扎建立VD动物模型,从行为学改变、组织病理形态学改变、超微病理学改变、蛋白表达激活等多个角度,系统地观察了天智颗粒对VD模型大鼠认知功能障碍的干预作用,同时从神经元自噬、突触可塑性以及对BDNF/TrkB通路影响的角度探讨天智颗粒对VD模型大鼠的神经组织损伤保护作用的分子生物学机制,为临床应用天智颗粒进一步治疗血管性痴呆提供循证医学依据。方法:1.实验分组及用药:8周龄雄性SD大鼠双侧颈总动脉结扎制备VD大鼠模型,造模成功后随机分成5组:模型组、天智颗粒低剂量组、天智颗粒中剂量组、天智颗粒高剂量组和阳性对照组,另设正常组和假手术组,正常组不做处理,假手术组只分离双侧颈总动脉不结扎,每组12只。各组灌胃给药剂量为:天智颗粒低剂量组0.66g/kg,天智颗粒中剂量组1.32g/kg,天智颗粒高剂量组2.64g/kg,阳性对照组0.45mg/kg,正常组、假手术组、模型组给予等量生理盐水,每日一次,连续给药2个月。2.Morris水迷宫实验观察各组大鼠行为学的变化。3.苏木素-伊红（HE）染色观察海马CA1区神经元细胞病理改变。4.透射电镜观察海马CA1区神经元突触、线粒体超微结构及自噬情况。5.免疫组织化学染色检测海马CA1区PI3K、CREB蛋白表达情况及位置。6.免疫蛋白印迹法（Western Blot）检测海马BDNF、TrkB、CREB、PI3K、p-Akt/Akt、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、SYN、PSD95的蛋白表达。结果:1.天智颗粒对VD模型大鼠学习记忆能力的影响:Morris水迷宫实验结果显示:（1）随着训练时间、次数的增加,各组大鼠的逃避潜伏期时间都呈逐渐缩短趋势。与正常组和假手术组相比,模型组在第三、四、五天的逃避潜伏期明显延长（P＜0.05）;与模型组相比,天智颗粒各剂量组和阳性对照组第三、四、五天逃避潜伏期明显缩短（P＜0.05）,且逃避潜伏期天智颗粒中剂量组＜低剂量组＜高剂量组。（2）与正常组和假手术组相比,模型组在平台所在象限停留时间百分比和平台穿越次数均明显降低（P＜0.05）;与模型组相比,天智颗粒各剂量组和阳性对照组平台所在象限停留时间百分比和平台穿越次数均增高（P＜0.05）。2.天智颗粒对VD模型大鼠海马CA1区神经元形态的影响:正常组和假手术组神经元细胞形态规则,结构完整,细胞核为圆形或椭圆形,位置居中,呈淡蓝染色,细胞排列整齐,层次清晰,分布均匀,无明显“丢失”现象,间质无明显水肿;模型组神经元细胞形态大小不一,形态不规则,细胞核固缩、深染,细胞排列疏松紊乱,层次不清,部分区域存在“断裂带”,神经细胞“丢失”现象明显,神经元与周围组织间隙增大变宽,细胞间质水肿,部分区域可见“空泡化”改变;天智颗粒低、高剂量组神经元结构完整性提高,深染程度降低,核固缩减少,神经元丢失情况减少,细胞间质水肿有所改善;天智颗粒中剂量组神经元细胞核大而圆,深染程度低,核固缩减少,胞浆内容物丰富,较模型组细胞排列恢复规则、紧密,细胞层数增加,神经元丢失情况明显改善,神经元与周围组织间隙变小,组织“空泡化”改变消失;阳性对照组神经元形态排列规则,结构完整性尚可,细胞恢复圆形或椭圆形,染色淡染,神经细胞“丢失”明显减轻,与周围组织间隙变小,水肿得到明显减轻,且无空泡化改变。3.天智颗粒对VD模型大鼠海马CA1区神经元超微结构的影响:电镜下观察各组大鼠海马CA1区神经元线粒体:正常组和假手术组神经元线粒体膜完整,线粒体嵴清晰可见,损伤情况无差异（P＞0.05）;与假手术组相比,模型组神经元线粒体肿胀、甚至出现空泡样改变,膜结构模糊,线粒体嵴减少或消失,计数显示“损伤型”线粒体数量明显增多（P＜0.05）;与模型组相比,天智颗粒低、中、高剂量组和阳性对照组神经元线粒体膜清晰完整,线粒体嵴清晰,损伤数量减少（P＜0.05）;电镜下观察各组大鼠海马CA1区神经元自噬情况:正常组和假手术组神经元细胞内仅见少量溶酶体;与假手术组相比,模型组自噬小体数量增多;与模型组相比,天智颗粒低、中、高剂量组和阳性对照组神经元自噬小体消失或减少。电镜下观察各组大鼠海马CA1区神经元突触情况:与正常组和假手术组相比,模型组海马神经元突触间隙增大,突触前后膜边界不清,且突触厚膜致密蛋白减少,神经元内线粒体结构异常,双层膜结构溶解,内嵴破坏,自噬小体数量增多;与模型组相比,天智颗粒组和阳性对照组海马神经元突触结构完整清晰,间隙适中,神经元内线粒体结构正常,未见或仅见少量自噬。4.天智颗粒对VD模型大鼠海马CA1区PI3K、CREB蛋白的影响:PI3K、CREB结果显示:PI3K表达在海马CA1区神经元细胞质中,CREB表达在海马CA1区神经元细胞核;正常组和假手术组表达较高;与假手术组相比,模型组表达明显减少;与模型组相比,天智颗粒组和阳性对照组表达明显增加。5.天智颗粒对VD模型大鼠自噬、突触可塑性相关蛋白的影响:免疫蛋白印迹实验结果显示:与正常组和假手术组相比,模型组BDNF、TrkB、CREB、SYN、PSD95、PI3K、p-Akt/Akt表达减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,天智颗粒组和阳性对照组BDNF、TrkB、CREB、SYN、PSD95、PI3K、p-Akt/Akt表达增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达减少,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.双侧颈总动脉结扎可以导致大鼠学习、记忆能力下降等认知障碍,提示制备血管性痴呆模型成功;应用天智颗粒治疗后能够改善VD模型大鼠痴呆症状,提高其学习记忆能力,对认知障碍具有改善作用,且中剂量效果最好;2.天智颗粒能够保护受损神经元,通过增加突触可塑性,调节自噬水平,改善突触功能。3.天智颗粒通过调控BDNF/TrkB对PI3K/Akt信号通路和SYN、PSD95蛋白的表达,降低了损伤神经元自噬水平、增加损伤神经组织中突触可塑性、保护神经元结构和功能的完整性,从而起到改善认知功能的作用。