南极大磷虾多肽制备工艺优化、脱氟及其体外活性的研究

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南极大磷虾中蛋白含量丰富,具有很高的营养价值,其包含全部人体所需的8种必需氨基酸,而且必需氨基酸与非必需氨基酸比例适宜,更有利于人体的吸收和利用,因而利用酶解法制备得到南极磷虾多肽,不仅有利于南极大磷虾资源的综合利用,而且能够为人类提供丰富优质的蛋白来源,因而具有十分广阔的开发和应用前景,目前利用酶解法从海洋生物中提取活性多肽常有报道,但对南极大磷虾多肽的提取工艺及其活性研究尚未见报道。本实验对南极大磷虾酶解工艺进行优化,得到了最优的工艺制备条件,对探索南极大磷虾多肽开发利用技术及其作为功能食品提供理论研究基础,有着重要的经济和社会价值。本研究利用木瓜蛋白酶对南极大磷虾进行酶解,通过正交分析对制备条件进行优化,并在此基础上对得到的多肽液进行脱氟处理,最后对其体外抗氧化能力及降血压的效果进行评价,本研究主要分为三部分。一、南极大磷虾多肽的制备及其成分分析利用木瓜蛋白酶以酶解法提取南极大磷虾多肽,以正交分析对制备过程中的料液比、加酶量、pH、温度、时间等五个因素进行优化,得到最佳的制备条件,并对最佳条件下制备得到的多肽液的主要成分进行分析。二、南极大磷虾多肽液的脱氟处理将牡蛎壳粉中的碳酸钙经过羟基磷酸化后制备成为改性的脱氟材料,然后通过单因素实验探索得到具有最佳脱氟效果的材料制备条件,并对该脱氟材料的吸附性能进行探索,最后以制备得到的磷虾多肽液为原液,分别进行静态吸附和动态吸附实验,测定材料对多肽液的脱氟效率。三、南极大磷虾多肽体外抗氧化及降压活性的研究将经过优化和脱氟处理的磷虾多肽液,进行体外生物活性实验。分别以DPPH法和邻苯三酚法测定南极大磷虾多肽对羟自由基和超氧阴离子的清除能力,从而检测其抗氧化活性;此外,还测定了南极大磷虾多肽对ACE的抑制率,从而探究其体外的降血压活性。总结:通过正交实验确定了木瓜蛋白酶的最佳酶解工艺:加酶量3000U/g,温度为55℃,pH值为7.0,时间为3h,验证实验表明最佳酶解条件下水解度为24.73%。其主要成分为:多肽87.32%,氨基态氮2.87%,多糖4.7%,脂肪0.83%,灰分为23.19%。通过单因素实验找到了脱氟率最大时的材料制备条件,即固液比为1:50,浸泡时间6h,老化pH为10.0,该材料对于pH在4~10之间的含氟溶液脱氟效果较好,并且溶液共存的Cl-、SO42对其吸附效率影响很小,有较强的抗干扰能力,其理论饱和吸附容量为8.13mg/g。利用脱氟材料对制备得到的多肽液进行吸附脱氟实验,静态吸附条件下其脱氟率高达达95.64%,动态吸附效率最高可达98.71%,经计算得到其动态吸附容量高于4.67mg/g。脱氟后的磷虾多肽具有很好的抗氧化剂降血压活性,其对羟自由基以及超氧阴离子均具有很好的清除效果,IC50分别为3.63mg/mL和11.72mg/mL,效果优于VE;制备得到的多肽对ACE也有很好的抑制效果,其IC50为10.87mg/mL
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