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目的:通过观察槲皮素对体外培养人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制及诱导凋亡作用,初步探讨槲皮素抑制宫颈癌细胞生长的可能机制,为槲皮素临床治疗富颈癌提供实验和理论依据。
方法:人宫颈癌细胞株HeLa细胞常规培养于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640培养液中,在37℃、5%CO2及饱和湿度培养箱中培养。实验分两组,即实验组(加入10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L及160μmol/L槲皮素)和对照组(未加入槲皮素)。MTT法检测不同浓度槲皮素处理HeLa细胞24h、48h和72h后,对HeLa细胞增殖的影响;AnnexinV-FITC/PI双染检测不同浓度槲皮素处理HeLa细胞48h后的凋亡率;RT-PCR和Western blot法测定槲皮素处理HeLa细胞48h后MK、caspase-3基因转录和蛋白的表达变化。
结果:MTT结果显示不同浓度的槲皮素作用于HeLa细胞不同时间后,细胞增殖受到显著抑制,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。20μmol/L浓度组在24h后出现抑制作用,随着槲皮素浓度的增大其抑制效果明显增强,呈浓度时间依赖关系(r=0.847,P<0.01;r=0.421,P<0.01)。FCM检测结果显示不同浓度槲皮素处理HeLa细胞后能诱导其凋亡,160μmol/L浓度组凋亡率为21.41±1.81%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示槲皮素作用HeLa细胞48h后MKmRNA表达显著下调,caspase-3mRNA表达增强(P<0.05)。Western blot检测结果显示槲皮素作用HeLa细胞48h后,MK蛋白表达显著下调,caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。
结论:1.槲皮素可显著抑制体外培养的人宫颈癌HeLa细胞增殖,该抑制作用具有剂量时间依赖性。2.槲皮素能诱导体外培养的人宫颈癌HeLa细胞凋亡。3.槲皮素对HeLa细胞抑制增殖和诱导凋亡的作用可能与下调MK、上调caspase-3水平有关。