目的 胰腺移植是目前治疗糖尿病的根本性措施之一。移植前，供胰需要切取和保存，因而缺血再灌注过程在所难免。防止缺血再灌注损伤是移植胰腺成活的关键步骤，也是目前研究的热点。缺血再灌注损伤的机制虽然尚未完全阐明，但是其和炎性因子的表达密切相关。P-选择素的激活就是启动诸多炎性因子的重要环节。目前的实验多侧重于阻止某一方面的炎性介质，效果有限。本实验采用Ps单克隆抗体阻止Ps的作用，阻断炎症的起始环节，抑制炎性因子的瀑布反应，从根本上阻止了胰腺的缺血再灌注损伤。缺血再灌注损伤得到有效的抑制，也就意味着移植胰腺术后并发症的减少，对移植胰腺的存活和功能有重要的意义。 实验材料与方法 一、实验材料 1．实验动物： 雄性Wistar大鼠，200±20g，由中国医科大学动物中心提供。 2．仪器和药品 显微外科器械 普通冰箱 超薄切片机 OLYMPUS双目显微镜及图像分析仪 Ps单克隆抗体，购于苏州医学院 Ps、ICAM-1、TNFα单抗及试剂盒，购于博士德生物公司 二、实验方法 1．标本采集： 本实验采用胰腺缺血再灌注模型，将所用大鼠随机分成假手术组、缺血融注组及Ps单克隆抗体处理组，每组15只，每组又根据三个时段各分5只。开腹后，找到脾下动脉。假手术组不做处理；鸡注组夹闭30分钟后再灌，分别于15＊0、60分钟后取材；实验组在再灌前5分钟经阴茎背静脉注抗PS单克隆抗体。三组取材后用PBS配制的10％甲醛液固定。 2．观察指标：将所取标本制成蜡块，切片。 2．IHE染色：将各组各时段组织染色并观察组织结构。二甲苯互、11J，脱蜡；梯度酒精人水；苏木素染色，冲洗后人 75％的盐酸酒精分色；返蓝后，伊红染色；梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。 2．2 免疫组化：显示k、ICAM－L TNTNFa的表达情况，并将所染玻片放在显微图像分析仪上收集数据。 三、数据处理 采用SPSS 10．0软件进行数据处理，对假手术组、干预组和缺血组的不同时间点积分光密度值进行方差分析。 实验结果 一、组织形态： 假手术组和实验组各时段胰腺结构损伤均不明显，再灌注组胰腺组织变化较明显且随再灌注时间的延长而加重。再灌注15分钟组织肿胀界限不清，胞浆内可见粉染颗粒，血管扩张、淤血；再灌注30分钟组织有灶状坏死，核溶解；再灌注60分钟可见组织大片坏死。 二、免疫组化： 观察Ps、ICAMJ、TNFa三个指标。统计分析结果为假手术 ·2·组与实验组组间和组内差异均无统计学意义河＞O．05人而缺血够注组与假手术组和实验组均存在组间差异计＜o．05L且组内亦有显著差异河＜o．05人 结 论 1．P巳ICAM一及’TNFcr随时间延长而表达增加。 2．PS可能是缺血再灌注损伤的起始因素。 3．抗一PS单克隆抗体对缺血再灌注损伤的胰腺有保护作用。