基于抗氧化谱效关系桑椹质量评价研究

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xujuenrong
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目的:通过桑椹的抗氧化活性以及HPLC指纹图谱的研究,建立桑椹抗氧化谱效关系,同时建立桑椹一测多评模式,为桑椹及相关产品质量提高与进一步的开发利用提供依据。方法:以采摘和购买市售的54批次桑椹药材为研究对象,采用DPPH法和FRAP法从清除自由基及总抗氧化能力方面进行测定,比较不同批次间的抗氧化活性;采用HPLC指纹图谱技术,对采摘和购买的桑椹进行研究,建立桑椹指纹图谱,并对其进行分析,探究不同产地、口感、采摘时间之间的关系,并采用灰色关联度法,将各色谱峰的峰信息与药效指标关联,分别筛选对抗氧化作用密切相关的色谱峰;采用支持向量机技术,建立指纹峰信息和药效学数据谱效关系模型,并进行验证;采用一测多评技术,以绿原酸为内参物,分别计算原儿茶酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮素的相对校正因子进行含量测定并与外标法对比,评价一测多评的准确性。结果:对来自全国的54批次桑椹药材进行抗氧化活性测定,DPPH法结果显示,S21桑椹批次抗氧化能力最优,IC50为0.041,桑椹果实储存时间较短的,口感以甜或淡的,抗氧化能力普遍较强;FRAP法测定结果显示S21批次抗氧化能力最优,在Fe SO4当量最高的20个批次当中,有15个批次为市售药材,占比高达75%,而且口感为甜的抗氧化能力普遍较强,这与DPPH法基本一致;建立了稳定可靠的指纹图谱,得到11个共有峰,指认出3个共有峰:绿原酸(4号峰)、芦丁(8号峰)和金丝桃苷(9号峰),另指认出52个批次有槲皮素,药材图谱相似度大部分在0.85以上,超过半数药材图谱相似度>0.95,说明54批药材的化学成分较稳定;聚类分析中,将不同产地桑椹药材分为三类,主成分分析中对药材质量影响较大的分别是5、3、4、11号峰,与聚类分析的结果具有一致性;采用灰色关联度法分别对DPPH和FRAP两种方法的药效相关峰进行筛选结果显示,由于测定方式的不同,DPPH法中除了2号峰,各共有峰与抗氧化药效关联度系数都在0.94以上,甚至有7个共有峰的关联度系数,都高达0.97,说明这些共有峰对药效有较强的影响,其中9、3、11、5、4号峰对药效贡献较大;FRAP法中,除2号峰外,关联度系数都在0.85以上,其中1、10、6、7、9、8号峰对药效贡献较大;采用支持向量机法建立桑椹“成分”-“谱”-“效”-“质”综合质量评价模型,通过48个样本进行建模,5个样本用于预测,模型的平均相对误差为18.2%。预测的平均相对误差为22.9%;建立了桑椹的一测多评模式,以绿原酸为内参物,原儿茶酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮素的相对校正因子分别为1.182、0.556、0.898、0.938,绿原酸含量0.0516~35.8605mg·m L-1,原儿茶酸含量0.504~17.3700mg·m L-1,芦丁含量1.0320~24.9965 mg·m L-1,金丝桃苷含量0.0740~0.8650mg·m L-1,槲皮素含量0.0691~0.6267mg·m L-1,且重复性和稳定性良好,其与外标一点法相对误差(RE%)均小于3%,结果无显著性差异。结论:通过对54批次桑椹抗氧化谱效关系的研究以及多种成分的含量测定,基于抗氧化能力建立桑椹“成分”-“谱”-“效”-“质”综合质量评价模型,达到推断桑椹药效优劣的目的,为桑椹质量多元综合评价提供参考,为桑椹及相关中成药质量标准提高提供依据。
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