苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng)多糖提取、分离、纯化及部分生物活性研究

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本文对苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng)进行了粗多糖提取工艺优化研究,并对其最佳工艺条件下提取的苦丁茶粗多糖进行分离、纯化、部分理化性质和一级结构表征研究,同时对各级苦丁茶多糖样品进行了抗氧化活性和抗CVB3活性系列的研究和探讨,初步探讨了苦丁茶多糖抗CVB3活性机理。以苦了茶粗多糖提取率为指标,分别讨论了水料比、温度、提取时间对苦丁茶粗多糖提取率的影响程度,获得正交表中各因素的最佳水平数,并根据L9(34)正交实验,确定了苦丁茶多糖的提取工艺的最佳参数组合为:水料比20:1、温度80℃、提取时间50分钟。采用热水提取苦丁茶粗多糖,Sevag法除蛋白、乙醇分级沉淀与DEAE-52离子交换柱和Sephadex G-100凝胶柱层析相结合,对苦丁茶粗多糖进行分离纯化,得到各级苦丁茶多糖样品,并对其进行了部分理化性质研究。采用离子色谱法分析苦丁茶纯化多糖K3组成,凝胶色谱法测定其相对分子量,红外光谱与旋光度法测定其糖环构型和糖苷键类型,采用CHNS/O分析仪分析了多糖K3中基本组成元素。结果表明苦丁茶多糖K3主要由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖五种单糖组成,其组成比例分别为0.095:0.4687:0.3803:0.046:0.01。其糖苷键以β-糖苷键为主,糖环构型以吡喃糖环为主,其相对分子量为8.5×104,基本组成元素中以C元素含量最高。采用清除超氧阴离子自由基、清除羟自由基、清除DPPH自由基、双氧水诱导红细胞氧化溶血、红细胞自氧化溶血实验,对A、K1、K33个苦丁茶多糖组分的抗氧化活性进行了研究,并同Vc进行了比较,结果表明:苦丁茶多糖对羟自由基、超氧阴离子自由基、对DPPH自由基都具有一定的清除作用;对双氧水诱导红细胞氧化溶血反应、对红细胞自氧化溶血反应都有显著的抑制作用。采用细胞病变(CPE)抑制法和四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法),研究了各级苦丁茶多糖样品对柯萨奇病毒(CVB3)的抗病毒活性和对人宫颈癌细胞(HeLa)细胞毒性,并从药物对细胞的保护,对病毒增殖的影响及对病毒感染细胞的综合作用三个方面初步探索了苦丁茶多糖抗CVB3病毒活性的机理。结果显示,苦丁茶多糖具有较强的的抗CVB3活性,且对HeLa细胞无明显的毒副作用,初步推测其抗病毒活性是作用在病毒和受体结合侵入Hela细胞阶段。
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