微生物脂肪酶催化酯交换反应制备生物柴油具有反应条件温和、底物醇用量少及污染小等优点，但游离脂肪酶价格昂贵，稳定性较差，反应后无法回收再利用，以其为催化剂制备生物柴油成本较高。因此，新型生物催化剂及催化工艺的开发及利用成为目前研究的热点。本文采用高效、快速且简便的包衣微晶酶法（Protein-Coated Micro-Crystals，简称PCMCs）固定洋葱假单胞菌脂肪酶（Pseudomonas cepicialipase，简称PS脂肪酶），提高脂肪酶催化性能，并将固定化酶（PS-PCMCs）运用于以乌桕梓油为底物的生物柴油制备中，主要结果如下：（1）本研究通过单因素实验及响应面法优化得到PS-PCMCs的最优制备条件为：62.3mg PS酶溶于200μL磷酸盐缓冲液（pH=7,50mmol/L）中，再向其中加入405μL饱和K2SO4溶液后混匀，随后将混合溶液逐滴加入到6.270mL丙酮中，并保持震荡状态（150rpm），然后离心5min，4800×g，移去上清液，再使用2mL丙酮冲洗沉淀一次，将所得沉淀真空干燥后既得PS-PCMCs。此PS-PCMCs催化545mg大豆油与146μL乙醇在40oC及200rpm条件下反应12h制备生物柴油，其得率可达91.27%（相应固定化率为87.22%），而同等条件下PS游离酶催化反应的得率仅为48.72%。（2）对PS-PCMCs的理化性质进行研究表明：PS-PCMCs的最适反应温度达60oC，其生物柴油得率为99.83%，而PS游离酶最适反应温度为50oC，其生物柴油得率为56.64%；经热处理（25-70oC）1h后的PS-PCMCs于60oC催化反应得到的生物柴油得率均在92.52-99.64%范围内，显示出良好的热稳定性，而PS游离酶的催化活性随处理温度的升高而显著降低。此外，PS-PCMCs经疏水性不同的有机溶剂处理3h后，催化活性仍较高，如经甲醇处理后其生物柴油得率仍有67.71%（PS游离酶基本失活），经四氢呋喃、叔丁醇、正己烷、正庚烷及异辛烷处理后，其生物柴油得率仍可稳定在92.84-97.41%范围内，说明PS-PCMCs的有机溶剂耐受性较好。当以PS-PCMCs催化不同油源制备生物柴油时，多数油源的生物柴油得率均高于83%，特别当以酸值较大（17.80mg-KOH/g-油）的乌桕梓油为反应底物时，未经任何优化其得率高达91.08%，说明PS-PCMCs底物适应性广泛，工业化应用前景较好。经扫描式电子显微镜（Scanning electron microscopy，简称SEM）检测发现PS-PCMCs的物理形态与K2SO4晶体及PS游离酶极为不同，这从侧面揭示了包衣微晶酶的形成过程。圆二色谱仪（Circular Dichroism，简称CD）检测得出PS-PCMCs蛋白质的α-螺旋含量较PS游离酶减少；相反，其无规卷曲含量较游离酶增加，这种二级结构变化可能是固定化酶活性增强的原因之一。（3）本文采用以最优条件制备的PS-PCMCs催化乌桕梓油与乙醇合成生物柴油，实验得最优制备条件如下：乌桕梓油量为588mg，加酶量为20%，醇油摩尔比为4：1，正己烷与油体积比为1：1，不含水，反应温度为55oC，转速200rpm，反应12h后其生物柴油得率高达98.50%。同时，在此基础上对固定化酶的操作稳定性进行了考察，结果表明：批次反应后，PS-PCMCs若不经任何处理，其催化活性下降较快。若在催化下一批次反应前使用丙酮处理固定化酶，则经8批次反应后，其生物柴油得率达69.92%。经正己烷处理的PS-PCMCs催化8批次反应后，其生物柴油得率仍可达82.29%，显示出较好的操作稳定性。