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本研究以刺芹侧耳“杏-1”为研究对象,进行了大麻副产物栽培刺芹侧耳技术条件优化试验;优化了刺芹侧耳八种菌丝胞外酶的提取方式;比较分析了不同配比大麻副产物培养基与棉籽壳培养基的八种胞外酶活性;采用蛋白质组学技术手段对大麻副产物和棉籽壳培养基诱导的刺芹侧耳胞外分泌蛋白进行了研究。结果表明:(1)大麻副产物栽培刺芹侧耳培养基的最佳配方为:大麻副产物60%(质量比,下同)、棉籽壳11%、21%麦麸、4%玉米粉、2%白糖、2%碳酸钙,pH 6.5,含水量65%。生物学效率达69.1%,比棉籽壳培养基高出8个百分点。(2)酸性纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、漆酶、锰过氧化物酶和木素过氧化物酶活性经pH4.8柠檬酸缓冲液浸提后所测酶活性大小依次为0.248 IU/ml,0.341 IU/ml,0.174 IU/ml,328 IU/ml,554 IU/ml,1264 IU/ml,经蒸馏水浸提后所测活性大小依次为0.085 IU/ml,0.131 IU/ml,0.111IU/ml,294 IU/ml,496 IU/ml,1039 IU/ml。比较可知,酸性纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、漆酶、锰过氧化物酶和木素过氧化物酶经酸浸提后测定的活性与水浸提相比有差异,这六种胞外酶的酸浸提方式所测得活性均高于水浸提方式,其中酸性纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶酸浸提后所测活性大小约是水浸提的两倍。因此对于这六种胞外酶,酸浸提效果明显优于水浸提。淀粉酶和蛋白酶的酸浸提活性大小依次为0.076 IU/ml,9.2 IU/ml,经水浸提后活性大小依次为0.129 IU/ml,10.8IU/ml,对于这两种胞外酶,水浸提效果明显优于酸处理。因此,在对刺芹侧耳胞外酶提取方式的优化中,酸性纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、漆酶、锰过氧化物酶和木素过氧化物酶可采用酸浸提的方式,而淀粉酶和蛋白酶可采用水浸提的方式。在本试验设置的几组大麻副产物配比中,60%大麻副产物培养基的漆酶、锰过氧化物酶、木素过氧化物酶、酸性纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、淀粉酶、可溶性蛋白酶等相关胞外酶采用上述最佳优化方式处理后所测活性依次为659IU/ml,661IU/ml,1552IU/ml,0.830IU/ml,0.743IU/ml,0.662IU/ml,0.159IU/ml,11.7 IU/ml均高于其他实验组(详见第四章),与棉籽壳培养基相比有差异,其中漆酶、锰过氧化物酶、木聚糖酶和蛋白酶与其他实验组相比有显著差异。这从胞外酶活性方面证明了大麻副产物栽培刺芹侧耳的可行性。以上数值均是经多次测试所得的平均值。(3)SDS-PAGE结果显示,在同一实验组胞外酶(酸性纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、漆酶、锰过氧化物酶和木素过氧化物酶)的两种不同浸提方式中,酸处理的泳道上条带比比水处理的多,说明酸处理实验组蛋白提取的更多。鉴定了219个棉籽壳培养基诱导的菌丝胞外蛋白和221个大麻副产物培养基诱导的菌丝胞外蛋白,并对所有鉴定蛋白的理化性质如等电点、分子量等进行了分析:等电点范围3-13,分子量范围5-170kD。蛋白的功能以及亚细胞定位根据文献报道以及G0注释进行分析:23%的蛋白为纤维素酶;3%蛋白为半纤维素酶;7%蛋白为果胶酶;26%的蛋白为木质素降解相关酶;6%蛋白为蛋白酶;16%蛋白为代谢相关蛋白;19%蛋白为转录和翻译相关蛋白。通过二甲基标记共鉴定了32个差异蛋白,其中20个蛋白外泌量在大麻副产物培养基中上调,另外12个蛋白外泌量在大麻副产物培养基中下调。对这些差异蛋白进行功能分析,发现这些差异蛋白主要是纤维素酶、果胶酶、木质素降解相关酶、蛋白酶。