转录因子Znhit1在小鼠视网膜上的表达及其作用研究

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目的:  眼的发育及其调控与整个机体的发育和调控有着不可分割的联系。眼特别是视网膜,是大脑的延伸部分,近30%的大脑的感官输入起源于视网膜。所以眼的发育与神经系统特别是中枢神经系统的发育关系密切。而视网膜是研究神经系统的复杂特性的理想模型。Znhit1在细胞周期调控及细胞分化等生命过程中均起到重要作用。但是在视网膜中还未有研究。本课题的研究目的是确定转录因子Znhit1在小鼠视网膜中的表达和功能。  方法:  我们用免疫荧光技术来检测Znhit1在C57BL/6J小鼠视网膜上的表达情况。对于Znhit1的功能实验,我们采用Cre/loxp方法建立视网膜特异性敲除Znhit1的体内研究模型。模型构建成功后,用电生理、眼底相干光断层扫描(OCT)、HE染色等方法检测转录因子Znhit1对小鼠视网膜的发育作用。以及通过TUNEL实验研究转录因子Znhit1对小鼠视网膜的作用机制。  结果:  1、不同年龄段的C57BL/6J小鼠中,Znht1表达于小鼠视网膜中的神经节细胞层、内核层及外核层。并且在5wC57BL/6J小鼠视网膜中,已发现在神经节细胞、无长突细胞、多巴胺能无长突细胞、胆碱能无长突细胞、Müller细胞、双极细胞、水平细胞均有表达。2、5周龄Znht1f/f,ix3-Cre+小鼠视杆系统下降,视锥系统下降。3、相对于5周龄、7周龄Znht1f/f, Six3-Cre-小鼠,5周龄、7周龄Znhit1f/f,Six3-Cre+小鼠视网膜明显变薄。4、7周Znhit1f/+,Six3-Cre+小鼠视网膜结构出现异常,但其功能似乎没有受到影响。5、P7天Znhit1f/f Six3-Cre+小鼠视网膜结构层次不明显, P7天Znhit1f/+,Six3-Cre+小鼠视网膜有突起现象。6、在视神经周围及视网膜中周边部,Znhit1f/f, Six3-Cre+小鼠比Znhit1f/f,Six3-Cre-小鼠细胞凋亡数略多。  结论:  以上的数据提示转录因子Znhit1在视网膜的发育过程中是一个重要的基因,并且可能是通过影响小鼠视网膜细胞的凋亡,进而引起小鼠视网膜变性。这一发现对我们理解视网膜复杂发育机制有一定的帮助,同时也为进一步理解神经系统功能和治疗神经退行性疾病提供理论依据。
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