应用电子显微镜技术、流式细胞术、免疫组织化学技术等方法,研究断喙应激对雏鸡免疫器官发育、细胞增殖、分化、凋亡及相关凋亡蛋白表达的影响,探讨断喙应激的缓解时间及应激对免疫器官发育抑制的机理,旨在为进一步研究采取措施减少断喙应激对雏鸡生长的影响奠定理论基础。试验一断喙应激对雏鸡免疫器官发育及超微结构的影响采用1日龄的健康绿壳蛋鸡240只(公鸡),随机分为2组(对照组和试验组),每组4个重复,每重复30只鸡。对照组不断喙,试验组于10日龄进行断喙。于断喙后12h、1d、3d、5d、7d随机从每组每重复抽取1只称重,心脏采血致死。取胸腺、脾脏、法氏囊,称重后保存于2.5%戊二醛磷酸盐缓冲液中,用于电子显微镜观察免疫器官淋巴细胞的超微结构。结果表明:(1)试验组雏鸡的体重在1周内均比对照组轻,在断喙后3d时差异显著(P<0.05);试验组雏鸡的胸腺重量均比对照组轻,但差异不显著(P>0.05),且在断喙后5d两者重量相差最大;试验组脾脏的重量在断喙后均比对照组轻,在5d时差异显著(P<0.05);试验组法氏囊的重量在断喙后均比对照组轻,在5d、7d时两者数值相差较大,且在5d显著差异(P<0.05)。(2)试验组雏鸡免疫器官指数均比对照组低。胸腺指数差异不显著(P>0.05);脾脏指数在断喙后5d时差异显著(P<0.05) ;试验组法氏囊指数在5d时呈现显著差异(P<0.05)。(3)试验组雏鸡免疫器官胸腺细胞可看到细胞核明显的应激反应,细胞核凝集较致密,部分细胞核即将溶解,并出现一定数量的凋亡和坏死细胞;脾脏淋巴细胞在断喙后呈现细胞体积较大,细胞核染色质凝集成块,细胞质形成的空泡较多,线粒体并有空泡现象出现;法氏囊淋巴细胞在断喙后细胞间隙较大,细胞的核质排空,核仁高度凝集,核膜消失,凋亡数量多,并有坏死细胞出现。试验二断喙应激对雏鸡免疫器官细胞周期及凋亡率的影响采用1日龄的健康绿壳蛋鸡240只(公鸡),随机分为2组(对照组和试验组),每组4个重复,每重复30只鸡。对照组不断喙,试验组于10日龄进行断喙。于断喙后12h、1d、3d、5d、7d随机从每组每重复抽取1只,心脏采血致死。取胸腺、脾脏、法氏囊,称重后保存于-70℃冰箱用于流式细胞仪分析免疫器官细胞周期、增殖指数及凋亡率。结果表明:(1)对照组和试验组的免疫器官淋巴细胞内都是以G1期为主,其余少量为S期和M期,且试验组免疫器官淋巴细胞内G1期细胞数量均比对照组高,S、M期细胞数量比对照组低;试验组胸腺细胞内在断喙后1d、3d出现异倍体;脾脏淋巴细胞内G1期细胞数量在断喙后1d表现出显著性差异(P<0.05);S期细胞数量在3d时低于对照组,且差异显著(P<0.05),在断喙后1d和3d出现异倍体。(2)试验组雏鸡免疫器官淋巴细胞增殖指数均比对照组低。胸腺细胞增殖指数在断喙后3d时差异显著(P<0.05);脾脏淋巴细胞增殖指数在断喙后3d、5d时差异显著(P<0.05);法氏囊淋巴细胞增殖指数在断喙后3d时差异显著(P<0.05)。(3)断喙后雏鸡胸腺、脾脏、法氏囊淋巴细胞的凋亡率均比对照组高,胸腺淋巴细胞凋亡率断喙后5d时差异显著(p<0.05);雏鸡断喙应激后胸腺细胞和法氏囊淋巴细胞凋亡率呈上升-下降-上升-下降的趋势,在7d时凋亡率最低;脾脏淋巴细胞的凋亡率先上升后下降,在断喙后3d时凋亡率最高,7d时未检测到凋亡细胞。试验三断喙应激对雏鸡免疫器官内相关凋亡蛋白表达的影响采用1日龄的健康绿壳蛋鸡240只,随机分为2组(对照组和试验组),每组4个重复,每重复30只鸡。对照组不断喙,试验组于10日龄进行断喙。于断喙后12h、1d、3d、5d、7d随机从每组每重复抽取1只。取胸腺、脾脏、法氏囊,称重后保存于中性福尔马林溶液中用于免疫组织化学测定免疫器官淋巴细胞相关凋亡蛋白(Bcl-2和Bax)表达量的变化。结果表明:断喙应激没有影响Bcl-2和Bax蛋白在免疫器官内的表达部位;降低了Bcl-2在免疫器官淋巴细胞内的表达量,胸腺细胞、脾脏淋巴细胞、法氏囊淋巴细胞内的表达量分别在断喙后1d、3d、1d时表达量最低;提高了Bax在免疫器官淋巴细胞内的表达量,在胸腺细胞、法氏囊淋巴细胞内的表达量均在断喙后5d时最高,脾脏淋巴细胞内的表达量呈上升-下降-上升的趋势。