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目的 观察搏癌丸体外诱导人肝癌细胞系HepG-2细胞凋亡,初步探讨其作用机制,为将搏癌丸开发成治疗肝癌的新型中药制剂提供科学的实验依据。 方法 采用药物血清学和细胞药理学方法,对比观察(阴性无药物血清对照、阳性药5-氟尿嘧啶对照)搏癌丸对HepG2细胞凋亡及凋亡相关调控基因Bax、Bcl-2及抑癌基因P53基因的影响。主要观察指标及方法如下: 1.以MTT法观察五个搏癌丸药物血清浓度对HepG2细胞增殖的抑制作用,从中选出搏癌丸的三个有效药物血清浓度。 2.以10%搏癌丸药物血清处理HepG2细胞48小时后,电镜下观察细胞形态学变化。 3.以流式细胞仪检测凋亡峰。 4.免疫组织化学染色(SABC)法检测搏癌丸三个有效药物浓度对Bax、Bcl-2、P53基因表达的调控。 结果 1.搏癌丸对HepG2细胞增殖的影响:10%、5%、2.5%搏癌丸药物血清三个有效浓度均对HepG2细胞增殖有显著抑制作用,P<0.01,其抑制率分别为31.5±3.43%、20.34±2.54%和12.66±1.98%;增殖抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,三个有效浓度组间均有显著性差异,P<0.01。 2.10%搏癌丸药物血清处理HepG2细胞48小时后电镜下观察细胞形态学变化:透视电镜观察结果表明,搏癌丸药物血请作用后,HepG2细胞核明显缩小,核浆比减少,核仁减少、浓缩甚至消失,核内异染色质明显增多,核膜完整可见早、中、晚期细胞凋亡,出现凋亡小体。 3.流式细胞仪检测结果表明:10%搏癌丸药物血清作用HepG2细胞24小时、48小时后,FCM检测的细胞凋亡率分别为18.31%、25.3%,均显著高于相应无药物对照组的3.54%,p<0.05。 4.搏癌丸对人肝癌细胞系HepG2凋亡调控基因表达的影响:搏癌丸能上调HepG2凋亡调控基因Bax、P53的表达,与无药物血清对照组比较,有显著性差异,P<0.05,且呈剂量依赖关系。搏癌丸对凋亡抑制基因bcl-2无显著影响。 结论 1.癌丸能在一定程度上抑制人肝癌细胞系HepG2细胞的增殖。 2.搏癌丸具有诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的作用。 3.搏癌丸诱导HepG2细胞凋亡的作用机制之一可能是上调促凋亡基因Bax和P53的表达。