应激(stress)反应是人类日常生活中不可避免的,创伤、高热、工作压力、应试等均是其常见的应激源。一般将应激定义为:机体对不协调状态或内环境稳定受到威胁时所做出的反应。亚急性应激或慢性应激,一般指超过 24 小时的持续或反复应激,主要伴有神经、内分泌、免疫和行为等变化。处于应激状态的躯体可产生一系列的生理、心理、内分泌、神经生化及免疫功能等方面的改变,这是机体受到应激而做出的适应性全身应答,借以维持机体内环境的相对稳定。同时,随着社会的发展,人们意识到亚急性应激比急性应激更能严重影响人类的身心健康。所以,亚急性应激在疾病的发生、发展中所起的作用也越来越受到关注。但国内有关这方面的研究尚处于刚刚起步阶段,尤其在不同应激源对机体免疫系统是否有影响、有何影响的方面还没有系统详尽的研究报道。 已有研究表明,位于小鼠的 17 号染色体上的 H-2 复合体(Histocompatibility 2 complex, H-2 complex),即主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex, MHC),是多态性最丰富的基因系统。H-2 复合体 I 区中分立的基因编码小鼠 II 类分子的α和β链。其中最主要的为 A 基因和 E 基因。A 亚区的基因多态性低于 E 亚区。有研究表明,绝大多数种系小鼠均表达 MHC II 类 I-Ab 基因,此为种系生存的必需基因。因此,本实验即选用多态性相对低的 A 亚区为目标区,通过对 A b 亚区内恒定基因片段的检测,分析研究不同应激源对·2·机体免疫反应影响的差异性,并试图找出其相关机制。本文建立了不同于急性应激的小鼠亚急性束缚应激模型(倾向于心理应激模型)与亚急性热应激模型(倾向于躯体应激模型),并于造模第 3、10、16 天对小鼠进行卵清蛋白抗原免疫,于两组小鼠各死亡1/3 时进行尾静脉采血,至死亡 2/3 时止,每天采血一次,共计 7 天。在可比的条件下用酶联免疫吸附实验(ELISA)对不同性质应激模型组小鼠抗体激发水平进行动态检测,分析亚急性心理应激与亚急性躯体应激对免疫应答的影响;同时建立了小鼠 9 天亚急性应激动物模型,对不同应激组及对照组小鼠血液中皮质醇进行定量检测;借助异硫氰荧光素(FITC)标记的 H-2IAb 单克隆抗体,运用流式细胞术,对不同应激小鼠淋巴细胞表面 H-2IAb 的表达进行定量检测;同时采用一步法RT-PCR 的方法检测 H-2IAb 基因表达水平;于第 1、5 天对 9 天亚急性应激动物模型小鼠进行卵清蛋白抗原免疫,通过测定小鼠的体重变化,分析体重变化率与免疫指标的关系。结果显示两种亚急性应激对体液免疫应答的影响存在显著性差异(p<0.05),7 天的检测中,束缚应激组抗卵清蛋白抗体水平(U)低于热应激组;皮质醇检测结果显示两应激组小鼠血液中皮质醇含量(nmol/L)均高于正常对照组,但无统计学差异(束缚应激组 5.57±1.75,热应激组 4.20±1.36,对照组 3.91±0.99,p>0.05);流式细胞仪检测结果显示不同应激组小鼠淋巴细胞表面 IAb 的表达(Mean.)有显著性差异,束缚应激组显著低于热应激组(2.86±1.76,6.83±2.32,p<0.05);RT-PCR 电泳结果显示所有小鼠均检测出 H-2 IAb 基因,有肉眼可见的强度区别,同时,与流式细胞仪检测结果相关(相关系数 r=0.649),证明了流式细胞仪中单克隆抗体的准确性;在小鼠免疫指标(U)发生变化的同时(束缚应激组 31.89±28.92,热应激组 76.06±72.71,对照组87.44±57.35),三组小鼠间体重变化率存在显著性差异(束缚应激组-0.09±0.06,热应激组-0.01±0.05,对照组 0.11±0.06),同时排除了免疫指标与体重变化率之间的相关性。通过分析得出以下结论:1、本实验成功建立了不同性质亚急性应激动物模型,即倾向于心理应激的亚急性束缚应激模型与倾向于躯体