中药耐药大肠肝菌的分离及其耐药质粒的提取与鉴定

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目的:探讨大肠杆菌对温阳通淋汤提取液的耐药性及其耐药的分子机制。方法:提取“温阳通淋汤”中的主要有效成分为小分子物质;临床分离UPEC,测定药物最低抑菌浓度(MIC碱裂解法提取质粒DNA,将其转化至大肠杆菌感受态细胞中,并研究转化菌的耐药性;通过琼脂糖凝胶电泳进行质粒的耐药性传递鉴定。结果:大肠杆菌CP9的MIC为1.0g/ml,抑菌圈的直径为2mm,对中药有高度抗药性。而所获得的耐药接合菌株的MIC为0.25g/ml,抑菌圈的直径为4mm,对中药表现出抗药性。接合传递实验表明,大小为45kb的质粒DNA片段可以从大肠杆菌CP9转移到大肠杆菌DH5α上。通过质粒谱发现,接合传递实验前在受体菌中没有发现质粒DNA,但是接合传递实验后发现供体菌大肠杆菌和获得的接合菌株中包含的质粒DNA大小相同(45kb)。药敏实验表明,耐药结合菌株的MIC为0.125g/ml,抑菌圈直径为3mm。由此表明,一个大小为45kb的质粒可以从供体菌大肠杆菌转移到受体菌革兰氏阳性金黄色葡萄球菌上,其平均传输速率为1×10-2接合子/受体,而且下一代的金黄色葡萄球菌质粒仍然可以保持抗药性。结论:大肠杆菌CP9的耐药质粒可以转化到金黄色葡萄球菌RN450RF;获得到耐药性接合菌株的质粒;获得结合菌株中包含的质粒与大肠杆菌的质粒大小相同(45KB),这表明,大肠杆菌质粒可以在革兰氏阳性金黄色葡萄球菌上复制和表达。
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