MdNAC52调控苹果花青苷和原花青素生物合成的机理

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苹果是世界重要的水果树种之一。提高苹果果实品质至关重要,其中果实的颜色是一项非常重要的农艺性状,而花青苷是决定苹果着色的主要色素,影响其生物合成的因素众多,如光照、激素、温度等。原花青素是一种类黄酮物质,其含量可影响果实的营养品质。花青苷和原花青素在植物生长发育中起着重要作用。虽然先前的研究已经确定了许多与花青苷和原花青素通路有关的转录因子,但对这些途径的调控机制仍然有待进一步研究。前期对不同芽变苹果品种的转录组测序,分析其结果,发现了一种NAC转录因子MdNAC52,它的基因转录水平在不同程度红色苹果中表现出差异。于是推测MdNAC52是一个与花青苷代谢相关的调控者,本研究利用‘烟富3号’为试材,通过克隆MdNAC52转录因子,在基因功能验证方面展开研究,主要结果如下:1.在‘烟富3号’苹果中,摘袋后2-12天果皮花青苷逐渐积累,在12天时达到高峰;此着色期间,原花青素含量降低。利用RT-PCR检测MdNAC52表达模式,发现其表达水平在摘袋第8天时达到高峰,随后降低。2.将MdNAC52在苹果‘王林’愈伤组织中过表达,结果发现苹果愈伤组织会变红,促进愈伤组织花青苷的合成同时促进花青苷合成途径中MdANS、MdUFGT等结构基因的表达量。3.利用酵母单杂交和体外互作实验EMSA验证了MdNAC52能够特异性结合MdMYB9和MdMYB11,从而促进花青苷合成。在植物体内,通过ChIP实验验证了MdNAC52与MdMYB9和MdMYB11存在相互作用关系。4.MdNAC52表达受光的诱导且表达模式与MdHY5呈正相关,对MdNAC52启动子上的顺式作用元件进行分析,发现包含G-box。通过酵母单杂交、体外互作实验EMSA和ChIP实验验证了MdNAC52作为MdHY5下游受光照的诱导。5.在过表达MdNAC52的苹果‘王林’愈伤组织中,原花青素含量显著增加,并且MdLAR表达量显著提高。通过酵母单杂交、体外互作实验EMSA和体内ChIP实验验证了MdNAC52与MdLAR相互作用,进而促进苹果愈伤组织中原花青素的积累。本研究证明了MdNAC52与MdMYB9和MdMYB11启动子结合,促进花青苷和原花青素的积累。并直接结合MdLAR调节原花青素的合成代谢。此研究为探索NAC转录因子在调控苹果花青苷和原花青素积累中的作用提供了新的见解。
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