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目的探讨烟草烟雾对人巨噬细胞超微结构的影响及红霉素(Erythromycin, EM)的作用。方法体外培养人类单核细胞系U937细胞,用佛波脂(Phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA,10ng/ml)诱导分化人巨噬细胞,用烟草烟雾提取物(Cigarette Smoke Extract,CSE)处理人巨噬细胞或EM预处理后用CSE刺激人巨噬细胞,(一)将细胞分组:①空白对照组;②CSE组(加入1%CSE孵育24小时);③CSE+EM24h组(1μg/ml红霉素预孵育24h后,加入1%CSE继续孵育24小时);④CSE+EM48h组(1μg/ml红霉素预孵育48h后,加入1%CSE继续孵育24小时)。(二)取孵育后各组细胞经预包埋、固定、漂洗、脱水、渗透、聚合、修块、切片后,经醋酸铀及柠檬酸铅染色后,用电子显微镜观察各处理组细胞超微结构。(三)取各组上清液分别离心去除沉淀后,避光加入2’,7’_二氯二氢荧光素二乙酯(2’,7’-dichlorofluorescin-diacetat, DCFH-DA),使其浓度为10uM,37℃下避光孵育30分钟后,立即予荧光酶标仪检测各组荧光强度。结果(一)各组人巨噬细胞超微结构的观察空白对照组:细胞圆或椭圆形,细胞胞质内可见少许线粒体、粗面内质网及溶酶体。绝大多数表面有许多微绒毛样突起,核偏心位,呈圆形或椭圆形,少数呈不规则形,染色质聚积于核膜下。CSE组:与空白对照组比较,烟草烟雾组中细胞胞质内不仅可见溶酶体、线粒体、内质网数量明显增多,亦出现线粒体嵴排列紊乱,嵴断裂逐渐崩解形成空泡(线粒体空泡化改变)、线粒体基质电子密度增高浓聚,次级溶酶体与初级溶酶体同时存在,甚至可见多个溶酶体聚集融合、粗面内质网轻度扩张的、细胞内基质较浓聚,即粗面内质网脱颗粒现象较明显。CSE+EM组:与CSE组比较,线粒体数量减少,未见空泡化改变,溶酶体数量减少,未见次级溶酶体,内质网数量减少、无扩张,粗面内质网脱颗粒现象较CSE组减少。(二)CSE刺激及EM干预对人巨噬细胞活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)释放量的影响:CSE组ROS释放量明显高于空白对照组(P<0.05),CSE+EM24h组ROS释放量较CSE组减少(P<0.05),CSE+EM48h组ROS释放量明显减少(P<0.05)。结论1、烟草烟雾刺激人巨噬细胞引起细胞超微结构的改变,表现为线粒体的肿胀及空泡化改变,溶酶体数量的增多,出现多个溶酶体聚集融合,粗面内质网扩张及脱颗粒现象;而红霉素预处理后可改善线粒体肿胀及空泡化改变,溶酶体数量减少,粗面内质网未见扩张,粗面内质网脱颗粒现象减少。2、烟草烟雾刺激人巨噬细胞释放活性氧明显增多,红霉素预处理后可降低活性氧释放量,提示可能是通过保护线粒体功能而抑制ROS的释放,这可能是红霉素抗氧化应激作用的机理。