【摘 要】
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从顿河红豆草含浓缩单宁的愈伤组织中提取总RNA,通过RT-PCR技术分步扩增顿河红豆草凝集素(OTL)基因的cDNA,并将其克隆到pGEM-TEasyVector载体上进行序列分析.1、根据红豆草凝
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从顿河红豆草含浓缩单宁的愈伤组织中提取总RNA,通过RT-PCR技术分步扩增顿河红豆草凝集素(OTL)基因的cDNA,并将其克隆到pGEM-TEasyVector载体上进行序列分析.1、根据红豆草凝集素氨基酸序列,设计简并核苷酸引物P1、P2,利用RT-PCR法扩增OTL基因的中间部分,重组质粒命名为pGEMOTL-M,序列分析表明其大小为499bp.2、采用引物P1和LifeTechnologies公司3RACE系统引物AP和AUAP,通过3RACE法扩增OTL基因的的3端,重组质粒命名为pGEMOTL-3,大小为879bp.3、根据已测得的OTL的N端氨基酶序列设计简并核苷酸引物P3,由pGEMOTL-3设计特异核苷酸引物P4、P5,通过两轮PCR反应得到OTL基因的5端编码区,重组质粒为pGEMOTL-5,大小为789bp.将三次克隆的OTL基因序列拼接在一起,得到OTL基因编码区的全长序列及3端非编码区,共919bp,含一编码251个氨基酸的开放阅读框和163bp的3端非编码区.在GenBank中经同源性分析表明,该序列及其推导的氨基酸序列与其它豆科植物凝集素具有高的同源性.
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