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第一部分T细胞淋巴瘤患者Sema4D和Plexin-B1的表达目的观察T细胞淋巴瘤患者肿瘤组织轴突导向蛋白4D(Sema4D)和Plexin-B1m RNA的表达和血清中Sema4D和Plexin-B1蛋白的表达情况。方法实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction reverse,RT-PCR)法检测21例T细胞淋巴瘤患者和10例反应性增生患者石蜡包埋蜡块组织中Sema4D和Plexin-B1的m RNA水平,ELISA法测定41例T细胞淋巴瘤(24例未经治疗及17例治疗后)及11例健康自愿者血清游离Sema4D和Plexin-B1蛋白表达水平。结果T细胞淋巴瘤肿瘤组织中Sema4D的m RNA的相对表达水平(中位数3.38,0.54~11.35)高于反应性增生组织(中位数0.73,0.03~1.57),差异具有统计学意义(P=0.002);T细胞淋巴瘤肿瘤组织Plexin-B1的m RNA的相对表达水平(中位数3.91,1.04~37.23)亦高于反应性增生组织(中位数1.93,0.58~8.37),差异有统计学意义(P=0.028)。正常对照组血清中游离Sema4D含量为:134.51(116.44~218.00)pg/m L,未经治疗组患者血清中游离Sema4D含量为:204.20(128.41~259.02)pg/m L,治疗后组血清中游离Sema4D含量为:157.29(138.52~236.25)pg/m L,组间差异具有统计学意义(P=0.007);未经治疗组血清中游离Sema4D水平较正常对照组高,差异有统计学意义(P=0.002);治疗后组血清中游离Sema4D水平与正常对照组相比,差异无统计学意义(P=0.161)。T细胞淋巴瘤正常对照组血清中游离Plexin-B1含量为:650.24(416.26~953.58)pg/m L,未经治疗组血清中游离Plexin-B1含量为:915.73(499.66~1172.58)pg/m L,治疗后组血清中游离Plexin-B1含量为:833.07(574.52~1109.45)pg/m L,组间差异有统计学意义(P=0.046);T细胞淋巴瘤组(治疗前和治疗后)血清中游离Plexin-B1水平分别与正常对照组相比,差异均具有统计学意义(P分别为0.044和0.022)。结论T细胞淋巴瘤患者肿瘤组织Sema4D和Plexin-B1的m RNA的相对表达水平均高于反应性增生组织;T细胞淋巴瘤患者血清中游离Sema4D和Plexin-B1含量均高于正常对照组,治疗后Sema4D和Plexin-B1的水平均有一定程度下降。第二部分Sema4D/Plexin-B1信号通路对T细胞淋巴瘤生物学行为的调控目的探讨沉默Sema4D基因对Jurkat细胞系增殖、凋亡和周期的影响。方法通过构建干扰Sema4D基因的慢病毒载体Sema4D-RNAi(Sema4D-RNA interference,Sema4D-RNAi),感染T细胞淋巴瘤Jurkat细胞系,应用RT-PCR法检测Sema4D RNA沉默效果,采用Western blotting法检测Jurkat细胞中Sema4D蛋白表达,CCK-8法检测转染前后Jurkat细胞的增殖能力,流式细胞术检测Jurkat细胞的凋亡和周期变化。结果正常对照组和RNAi阴性对照(Negative Control RNAi,NC–RNAi)组Sema4D RNA的相对表达水平分别为1.01±0.01、1.01±0.02,差异无统计学意义(P=0.768)。重组载体组A组、B组、C组Sema4D m RNA的相对表达水平分别为0.81±0.06、0.62±0.03和0.62±0.05,分别与NC–RNAi相比组间差异均有统计学意义(P<0.05)。NC-RNAi组(0.99±0.03)及正常对照组(0.99±0.04)两者Sema4D蛋白的相对表达水平差异无统计学意义(P=0.907);重组载体A组、B组和C组Jurkat细胞中Sema4D蛋白的相对表达水平分别为0.47±0.04、0.32±0.03和0.31±0.02,分别与NC–RNAi相比组间差异均有统计学意义(P<0.05)。重组载体组C组Sema4D干扰效果最佳,以此进行后续研究。重组载体C组Jurkat细胞的增殖从第48小时开始增殖明显减慢(P<0.05);而NC-RNAi组及正常对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。重组载体C组G0/G1期比例(61.43±0.91)%高于NC-RNAi组(47.39±0.85)%,差异具有统计学意义(P=0.000);NC-RNAi组及正常对照组G0/G1期比例((46.58±0.61)%),差异无统计学意义(P=0.251)。重组载体C组S期比例(29.38±1.17)%低于NC-RNAi组(42.11±1.63)%,差异具有统计学意义(P=0.000);NC-RNAi组与正常对照组S期比例((43.49±1.37)%)差异无统计学意义(P=0.325)。正常对照组G2/M期比例((5.18±0.44)%)与NC-RNAi组((5.30±0.87)%)差异无统计学意义(P=0.850),且重组载体C组G2/M期比例((5.85±0.44)%)与NC-RNAi组差异无统计学意义(P=0.387)。重组载体C组细胞凋亡率(12.13±0.21)%高于NC-RNAi组(2.75±0.16)%,差异具有统计学意义(P=0.000),NC-RNAi组及正常对照组细胞凋亡率((2.52±0.15)%)差异无统计学意义(P=0.159)。结论沉默Sema4D基因可抑制人Jurkat细胞增殖,促进凋亡,可能与细胞被阻滞于有丝分裂的G0/G1期有关。