桑螟性腺提取物的GC-MS分析及低温诱导转录组和代谢组学研究

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第一部分桑螟种群性比统计及雌性性腺提取物的气相色谱-质谱分析桑螟(mulberry pyralid,Diaphania pyloalis Walker),俗称油虫、卷叶虫、青虫等,属于鳞翅目螟蛾科昆虫,在中国广泛分布,其幼虫主要以桑树的叶子为食,是桑树主要害虫。目前桑螟防治方法主要是化学农药防治,但是由于桑螟爆发期和养蚕期基本一致,农药选择受到严格限制,桑螟的卷叶啃食习性也严重影响农药防治效果,必须研究和探索新的防治药物和方法。目前害虫的绿色防治是一个重要发展方向,本实验以开发桑螟性信息素防治技术为目标,研究分析了桑螟性腺提取物的成分。主要实验内容和实验结果如下:镇江5-9月份生产桑园和大棚桑园自然发生的桑螟种群蛹期平均雌性占比为86.98%和83.05%,调查桑螟单蛾交配后代的雌性占比为82.91%,自然条件下桑螟未发现有孤雌生殖后代产生。对桑螟处女蛾性腺的二氯甲烷和正己烷提取物采用GC-MS进行化合物鉴定分析,发现了5种与已知昆虫性信息素类物质结构具有一定的相似性化合物:2-[[2-[(2-Eth)Met]Cyc]Met]Cyc,Aci,Met,Est、E2,Z15,Me14-18:OH、Z9,Z12,Z15-18:Aci:Iso:Est、Me6,Z8-14:OAc、Z9,Z12,Z15-18:Aci-4:Est,可以作为桑螟性信息素候选物质进行生物学鉴定。第二部分低温诱导桑螟转录组和代谢组学分析桑螟以老熟幼虫的形式分布在桑树的裂隙、虫孔或者是枯枝叶中越冬。我国北方桑螟越冬死亡率很高,但是南方死亡率比较低。桑螟的休眠诱导机制、抗寒机理都缺乏了解。为了了解桑螟5龄幼虫在低温诱导状态下的生理、生化代谢变化情况。以5龄桑螟作为研究材料,并将桑螟进行低温诱导,通过转录组和代谢组分析,研究桑螟在不同低温状态下基因的表达情况和代谢物的含量变化,为进一步了解桑螟的休眠越冬机制提供线索。本实验使用5龄第3-4日的桑螟幼虫,分为以下5种处理:正常状态桑螟作为对照组(1号样本),分别在12℃低温状态饲养8h(2号样本)、8d(3号样本)、16d(4号样本)、16d再置于4℃持续30d(5号样本),每个样本取样40头幼虫。1.桑螟5龄幼虫低温诱导的转录组学研究5个样本抽提RNA后经过转录组测序,分别获得Clean reads数量36736879-44374781个,能比对到unigene参考序列的比例占85.84%-91.36%。从差异基因韦恩图和KEGG富集散点图分析表明桑螟在12℃低温处理达8d时基因表达状态已经发生重大变化,推测在3号、4号样本与2号样本之间差异表达的基因中可能存在着桑螟低温诱导休眠分子机制相关的基因,5号样本与4号样本间差异表达基因可能与桑螟越冬低温适应性有关。低温诱导桑螟5龄幼虫组织的甲醇水混合抽提液经过UPLC-MS分离检测。,发现38个负离子色谱峰和34个正离子色谱峰,一共获得72种小分子化合物。分析发现有14种化合物含量随低温诱导时间的延长含量有所增加,但是有16种化合物随着低温时间延长含量减少,推测这些物质可能与桑螟的休眠诱导或休眠过程高度相关。根据以上结果可以认为,桑螟5龄3-4日的幼虫在12℃低温下饲养8d左右会引起基因表达方面的变化和体内有机物代谢与含量的变化,这些变化的物质与桑螟的休眠诱导或低温适应性可能有紧密关联。
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