Ndc80复合物可塑性及动态组装分子机制研究

来源 :中国科学技术大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yayaguo123
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染色体的不稳定性或异常分离被广泛认为是癌症发生的标志性事件,细胞有丝分裂过程中染色体的正确运动与分离是由纺锤体微管和动点的相互作用来协调实现的。我们早期的研究发现,中心体激酶Nek2A在有丝分裂时期中有新颖的动点定位,敲除Nek2A将导致染色体的不稳定性,然而Nek2A如何参与纺锤体检验点信号途径还不甚清楚。Hecl是动点-微管核心衔接点Ndc80复合物的主要组分,但Hecl在癌症细胞中高表达的原因一直未能攻克。我们最新的研究发现,Nek2A通过磷酸化Hecl调控其与动点内层结构蛋白质CENP-H之间的相互作用,我们拟从Hecl在有丝分裂过程中的地位和精细调控入手,来揭示其与癌症发生的关联以及Nek2A介导的新颖的动点组装途径。我们证实了Spc24-Spc25亚复合物直接结合CENP-H的N端1-105aa,Hecl通过C端超卷曲螺旋和亮氨酸富集区(461-642aa)结合在CENP-H的中心包含超卷曲螺旋的106-148aa区域,合理分配了CENP-H提供的装配平台。Nek2A在有丝分裂过程中能磷酸化Hecl的Ser165位点并借此调控Hecl和CENP-H之间的相互作用。颇有意思的是,Nek2A介导的磷酸化调控并不决定Hecl的动点定位。然而,在过表达模拟Hecl非磷酸化突变体的中期细胞中出现部分富集极区的滞后染色体和大量syntelic错误连接,进一步观察发现,后期个别染色体不能完全分离,姐妹染色单体之间保持桥联。我们把所有的表型归结为Nek2A的动态磷酸化影响Hecl的微管亲和力差异,并通过体外微管共沉淀实验得以验证。综上所述我们提出了新颖的分子模型,我们认为Nek2A介导的磷酸化引起Hecl的N端球状区域发生取向改变,一方面通过Hecl-CENP-H相互作用驱使Ndc80复合物收敛承接臂,促进动点紧凑和应力传承,另一方面上调Hecl的微管亲和力和结合数量,迅速建立动点-微管双极连接,从而将动点组装、微管连接和纺锤体检验点信号通路有机整合。为了进一步揭示有丝分裂过程中Ndc80复合物的过渡型结构特性及其验证我们提出的“时序组装”假设,我们应用了新颖的SNAP实时标记技术,并发现体内Spc24-Spc25拥有两个具差异动念性和功能性的储备库,其中核仁储备库侧重于在Hecl-Nuf2之前快速锚定动点,胞浆储备库则侧重于保障动点定位的饱和度。Ndc80的时序组装模型很好地诠释了其复合过渡型的功能特征,并将动点内层结构的缜密性衔接和外层空间的微管捕获特性高效地耦合。
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