慢性肝脏疾患对我国人群的健康形成了巨大威胁。不同的物理、化学及生物原因包括病毒感染、酒精性和非酒精性过度饮食、中毒、自身免疫及胆汁淤塞等引起的肝损伤及其炎症的反复刺激，不仅导致肝实质细胞的死亡，而且诱导肝间质组织发生纤维化，进而演化成肝硬化，肝衰竭，甚至肝癌等终末期肝病。目前有效治疗终末期肝病唯一选择是肝器官移植，受限于供体肝源的极度短缺，在数十万的肝移植等待人群中，每年只有不足万人有幸得到肝源。肝细胞移植是肝移植的替代疗法，尤其是对于急性中毒性肝衰竭患者。但在体外获得足够数量的，且可用于细胞治疗的人肝实质细胞依然是本行业未突破的技术瓶颈。进一步的动物研究发现，即使肝细胞在肝损伤模型中短暂扩增并成活，但由于缺乏胆管再生，胆汁外泄引起的肝组织损害依然发生。使用间充质干细胞或造血干细胞治疗慢性肝病和肝硬化在全球进行了一系列的临床实验，这些细胞治疗取得了一定的程度上改善肝功能的效果，但能否能实质性地再生肝组织仍是疑问。相较于肝脏器官或成熟肝细胞，获取具备分化成肝细胞和胆管上皮细胞双潜能的成体肝脏干细胞成为业内热点，并成为细胞移植治疗终末期肝病的希望之一。尽管缺乏临床研究，但异体移植的肝脏干细胞治疗晚期肝病的潜力，已在不同实验室和不同的肝损伤动物模型中得到了多次成功的验证。目前，肝脏干细胞的分离方法大多基于细胞表面抗原标记的流式分选法，其缺点包括过度依赖于设备支持，成本高，操作流程费时费力。本论文基于干细胞体外克隆形成能力，结合已有的研究，跳过流式分选，建立了一种快速在成年小鼠肝非实质细胞中淘选肝脏干细胞的方法。该方法在4天内即可淘选出具有以下特性的肝脏干细胞克隆:1）单个非肝实质细胞来源的克隆可在一周内获取，并在一个月内扩增建系储存;2）多次连续传代后仍保持增殖能力和干性;3）扩增后依然表达肝脏干细胞的标志物;4）扩增后保持肝/胆双向分化潜能;5）体内分化为成熟肝实质细胞并促进损伤肝脏修复。同时，该方法可以在人源肝非实质细胞中淘选出具有肝向分化潜能的上皮样克隆。综上所述，本研究建立了一种肝脏干细胞快速淘选和扩增的体系。该技术将为肝脏干细胞的生物学研究和临床应用提供重要基础。