产黄青霉（Penicillium chrysogenum），是工业上用于发酵生产β-内酰胺类抗生素—青霉素的重要真菌。作为丝状真菌，它一般是通过菌丝延伸和分枝进行生长，但具体的调控机制尚未完全了解。先前的研究表明青霉素的分泌与菌丝延伸速率及顶端生长有关，因此对产黄青霉进行形态学描述具有重要意义。　　几丁质是大部分丝状真菌中细胞壁的主要组成成分，其合成是一个复杂的过程，关键酶为几丁质合成酶。几丁质合成酶(EC2.4.1.16)的作用是催化N-乙酰葡萄糖胺残基通过β-1，4-糖苷键连接成几丁质。许多研究表明，几丁质合成酶具有结构和功能多样性，并且在曲霉属（Aspergillus）的生长和形态发生中起重要作用，然而产黄青霉中还未见相关方面的研究报道。　　本文利用BLAST工具从产黄青霉中搜索与构巢曲霉（Aspergillus nidulans）中几丁质合成酶具有相似性的基因，共找到三个同源性序列，分别编码Ⅲ类几丁质合成酶CHS4和两个假定蛋白，核酸序列一致性介于74％和78％之间，氨基酸序列一致性分别为87％、76％和74％。我们选择一致性最高并编码Ⅲ类几丁质合成酶CHS4的基因chs4作为目的基因进行深入研究。　　通过构建干扰载体来研究chs4的基因功能。为达到高的转化率，对影响原生质体制备和再生的因素进行了分析。结果表明，当菌龄为48 h，裂解酶浓度为4 mg/mL，酶解温度为30℃，酶解时间为5h时，原生质体产量最高，达到1.41×107个/mL。而当酶解时间为4h，平板上层琼脂浓度为1％时可以达到最高的再生率，约为33％。　　载体转入产黄青霉后，用反转录PCR和荧光定量PCR检测chs4的表达水平，发现各菌chs4基因沉默的程度有所不同。转化株形态与原始菌有很大不同，生长缓慢，菌丝短且分枝多。所有转化株的生长速度和孢子产生率相对于原始菌都有明显地下降，暗示着chs4在菌丝发育和孢子形成中有重要作用。　　显微镜观察各菌株在液体发酵中的菌丝形态。种子时期，除了PcRNAi1-15形态与原始菌类似外，其它菌的菌丝生长都有严重缺陷。特别是PcRNAi1-17，它的菌丝短小膨胀，并且发育不良。PcRNAi2-1与PcRNAi2-6的菌丝都变得较为粗短，并且分枝较原始菌多。而且PcRNAi1-17与PcRNAi2-1明显慢于其他菌，菌液很稀，菌丝多结团成球。进入发酵期后，各个菌的菌丝都发生缠绕形成菌丝团，菌丝缠绕的紧密度由大到小依次为:PcRNAi1-17＞ PcRNAi2-1＞PcRNAi2-6≥Pcoriginal＞ PcRNAi1-15。PcRNAi1-17与PcRNAi2-1很快就形成了带有致密核的菌丝球，并且PcRNAi1-17的菌球直径明显大于PcRNAi2-1。　　除PcRNAi1-15外的其它转化株青霉素产量都高于原始菌，特别是PcRNAi1-17和PcRNAi2-1，它们的青霉素产量分别比原始菌高27％和41％。由此推断，形态的变化对青霉素产量有一定的影响，可能与菌丝的分枝增多有关。另外菌球的形成使得发酵液粘度下降，有利于营养物质传递，可能也是青霉素产量提高的一个原因。