本文主要从以下两部分展开论述：　　第一部分 核糖核酸酶氧化折叠机制的新探索　　牛胰核糖核酸酶(bovine pancreatic ribonuclease A，RNase A)具有高度稳定的结构，而且变性后容易复性，因而被作为模式蛋白广泛应用于蛋白质的氧化折叠研究。RNase A的氧化折叠过程伴随二硫键和结构的形成。具有稳定结构的折叠中间体自由能较低，可以有效蓄积，形成特定的折叠途径。RNase A氧化折叠早期阶段折叠中间体不具有稳定结构，理论推测，该阶段应该是动力学控制下的二硫键随机配对过程，不存在具体的折叠途径。但是，前人研究发现无结构的折叠中间体并非随机分布，并且将其归因于肽链中存在的热力学稳定相互作用。除此以外，是否还存在其他因素可以导致RNaseA氧化折叠早期无结构折叠中间体的非随机性分布，目前尚不可知。　　本论文围绕RNaseA变性过程折叠中间体的二硫键重排反应，对RNase A无结构折叠中间体非随机性分布的影响因素进行了探索研究。制得RNaseA变性过程折叠中间体，使用反相HPLC对各单体进行有效分离，并确定各单体所含二硫键的配对方式。通过AUT电泳(acetic acid-urea-Triton polyacrylamide gel electrophoresis)对各单体存pH5条件下的二硫键重排特征进行检测。结果发现，RNaseA变性过程折叠中间体的二硫键重排反应速率存在差异，进而推测，RNaseA不同巯基反应活泼性可能不同。这一假设在58-72区段的RNase A同源多肽中得到证实:Cys58巯基反应活泼性明显高于Cys72。巯基反应活泼性差异可以影响二硫键的氧化生成及折叠中间体的二硫键重排反应，进而在一定程度上导致无结构折叠中间体的非随机性分布。因此，RNaseA氧化折叠早期阶段可以修正为如下两相:分子内二硫键的非随机氧化相及热力学稳定相互作用和动力学巯基反应活泼性差异驱动下的二硫键重排相。其中，热力学稳定相互作用和动力学巯基反应活泼性差异共同导致了无结构折叠中间体的非随机性分布。　　第二部分 多肽原核表达新技术的研究　　胰岛素链是基因工程技术生产重组胰岛素的重要表达产物，为了提高其表达产量或复性效率，通常需要进行融合表达。相应的融合标签从寡肽到大分子蛋白，分子量范围很广。我们猜想，胰岛素链本身是否也可以作为融合标签促进其他异源性多肽的原核表达。本论文将胰岛素链（小胰岛素原、胰岛素B链、A链）与不同种类的目的多肽（GLP-1、C端延长的GLP-1、恩夫韦肽、利那洛肽、无结构人造多肽）分别融合，使用Tricin-SDS-PAGE和Western blot检测其在大肠杆菌表达系统中的重组表达。结果显示，所测目的多肽均可以实现有效融合表达，其表达形式为包涵体，可以有效保护目的多肽免受蛋白酶的降解，提高表达产量。表明，胰岛素链是一种优良的新型小分子量融合标签，可以用于异源性多肽，特别是多肽类药物的原核表达，能够有效提高其表达效率，降低生产成本。