基于脑保护机制的针刺治疗实验性脑血肿时效关系的研究

来源 :天津中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wavepku
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目的:  通过观察针刺对脑出血模型大鼠血肿形成后不同时间的神经行为学评分、血肿周围脑组织及其细胞内病理形态学和相关指标变化的影响,研究针刺作用及其时效性的相关保护机制。经过实验可以阐明针刺治疗脑出血的时效关系,从而确定针刺治疗的最佳时机,力争突破脑出血急性期不能应用针刺的壁垒,为针刺治疗脑出血特别是急性期的临床应用提供理论及实验依据。  方法:  采用Wistar大鼠尾状核自体血缓慢注入法制作脑出血模型。神经行为学观察参照Bederson和Longa评分方法;光镜下观察脑组织病理形态改变,透射电镜观察脑细胞超微结构;脑组织细胞凋亡率测定分别应用TUNEL法及流式细胞术;脑细胞内Ca2+浓度通过特异性荧光探针Fluo-4与Ca2+结合而荧光强度增强的技术原理,应用荧光分光光度仪进行测定;脑组织氨基酸含量应用高效液相色谱法进行检测;脑组织BCL-2和BAX mRNA阳性细胞率应用原位杂交法测定,其基因表达采取RT-PCR半定量测定方法,BCL-2和BAX蛋白阳性细胞率应用免疫组化法。  结果:  (1)神经行为学:脑出血急性期造模后和处死前Bederson、Longa评分皆明显升高,脑出血急性期后3h、9h针刺干预后,Bederson、Longa评分皆明显降低。  (2)病理组织形态学:脑出血急性期病理变化极为明显,且程度相当严重,而经过针刺干预后病理变化明显减轻,尤以3h、9h开始干预病理变化最轻。  (3)细胞凋亡:脑出血急性期TUNEL阳性细胞率显著升高,针刺各组均偏低,但高于假手术组,且针刺干预越早该比率越低;流式细胞检测结果基本与其一致。  (4)Ca2+:脑出血急性期Ca2+浓度显著升高,针刺各组均偏低,但高于假手术组。  (5)氨基酸:脑出血急性期Glu、Asp含量明显增多,而针刺各组均偏少,但仍多于假手术组,且针刺干预越早含量越少,Glu/GABA比值与Glu、Asp含量变化规律基本一致,GABA、Gly含量与Glu、Asp含量变化规律基本相反。  (6)BCL-2、BAX:脑出血急性期BCL-2 mRNA、BAX mRNA阳性细胞率显著升高。前者针刺各组升高更明显,后者针刺各组均降低,但仍高于假手术组,且针刺干预越早比率越低。BCL-2 mRNA、BAX mRNA表达和BCL-2、BAX蛋白阳性细胞率分别与BCL-2 mRNA、BAX mRNA阳性细胞率变化规律基本一致;BCL-2与BAX mRNA表达的比值、BCL-2与BAX蛋白表达的比值变化规律基本与BCL-2 mRNA阳性细胞率一致,而与BAX mRNA阳性细胞率相反。  结论:  针刺治疗能够改善脑出血急性期所造成的血肿周围脑组织相关的病理变化,从而在脑出血急性期起到保护脑组织的作用,且脑出血发生后针刺干预越早疗效越好。
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