论文部分内容阅读
男方因素导致不孕不育所占比例约为50%,其中约19%与精子活力低下(又称弱精子症)有直接密切关系。研究表明弱精症的病因多样,特发性弱精症是其中数量较多、病情较重、病因不明的一类。遗传因素是导致特发性弱精症发生的一个主要因素。目前临床对于这类患者常采用人工辅助生殖技术治疗,这样就不可避免的导致异常基因发生垂直传递,到了下一代又会面临不育的难题。由此可见,要从根本上治疗特发性弱精症的问题,就必须了解精子发生的分子机制。前期的实验研究中我们定位及克隆了人类生精相关基因DNAJB13及其小鼠同源新基因Dnajbl3。RT-PCR显示DNAJB13在人睾丸中有高表达,在人成熟精子中亦有表达,原位杂交实验结果显示DNAJB13表达于各级生精细胞。目的和方法：DNAJB13在人类睾丸组织中有高表达,但目前对DNAJB13定位、功能及作用的分子机制均尚不清楚。本研究拟通过Western Blot、免疫荧光共定位、免疫电镜研究DNAJB13蛋白在人成熟精子中的表达及定位；通过基因突变筛查研究DNAJB13基因与人类特发性弱精症的相关性；利用免疫共沉淀技术联合液相质谱分析研究DNAJB13在成熟精子运动过程中的相互作用蛋白。结果：①Western blot结果显示DNAJB13蛋白在成年人成熟精子中有表达；免疫荧光共定位将DNAJB13蛋白进一步定位在人成熟精子尾部；免疫电镜实验则将其更精细的定位在人成熟精子鞭毛中段放射辐、外侧微管、外周致密纤维以及线粒体。②国际上首次在特发性弱精症病人中发现DNAJB13基因第2外显子存在2个错义突变(c.857T>C、c.912T>C),另外检测到第2外显子3个已知多态位点(rs199547235,rs10793069,rs10793068)；第3外显子2个已知多肽位点(rs65326,rs145909750),第8外显子3个已知多态位点(rs2306820,rs2306819,rs72982975)。③筛查到包括HKI和LDHC在内的一批蛋白,在人成熟精子中可能与DNAJB13存在相互作用。结论：DNAJB13定位于成熟精子尾部鞭毛中段放射辐、外侧微管、外周致密纤维以及线粒体,提示其功能可能与精子运动相关；突变筛查结果提示到DNAJB13功能可能与人类特发性弱精症相关,将其列为导致特发性弱精症的候选基因；作用机制可能是通过在人精子中与HKI和LDHC的相互作用,以糖代谢过程作为其可能的通路之一影响精子运动中能量的供应。