肾虚型自然流产蜕膜黄体效应、TGF-β1表达及补肾中药对流产大鼠干预的研究

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目的:临床实验研究主要从基因及蛋白水平探讨肾虚型早期自然流产与孕激素受体(PR)、转化生长因子-beta1(TGF-β1)的相关性以及外周血单个核细胞TGF-β 1mRNA与蜕膜TGF-β 1mRNA的相关性;动物实验研究主要从免疫调控角度进一步探讨补肾健脾中药助孕3号方防治自然流产的作用机理。 方法: 1 肾虚型早期自然流产患者蜕膜黄体效应、TGF-β1表达的相关研究: 收集在广州中医药大学第一附属医院就诊的流产患者,选择肾虚型早期自然流产清宫孕妇23例为实验组,设立非肾虚型早期自然流产清宫孕妇40例(血瘀型20例,血热型20例)和正常早期妊娠的孕妇要求人工流产者20例为对照组。于吸宫前刮取5克蜕膜组织,运用RT-PCR方法检测蜕膜PRmRNA、TGF-β 1mRNA及外周血单个核细胞TGF-β 1mRNA的表达,同时采用免疫组化法(LSAB)检测蜕膜PR、TGF-β1的表达,并在光镜下观察蜕膜组织形态结构。 2 助孕3号方对肾虚黄体抑制妊娠流产大鼠血清TGF-β1影响的研究: 雄性10-12周龄SPF级SD大鼠,雌性8-10周龄SPF级SD大鼠,体重约200~250克。将SD大鼠雌雄合笼,每日晨阴道涂片,以发现大量精子者作为妊娠第1天。以羟基脲与米非司酮建立肾虚黄体抑制大鼠流产模型,妊娠第1至7天羟基脲灌胃450mg/Kg/天,用生理盐水配制,1ml/日;第7天时给予米非司酮(3.75mg/kg),用生理盐水配制,1ml/日。共分5组:A多力玛组(羟基脲+米非司酮+多力玛),造模的同时,用多力玛1.5mg/kg/日灌胃,用生理盐水配制,2ml/日,连续7天;B造模组(羟基脲+米非司酮);C助孕3号方高剂量组(羟基脲+米非司酮+助孕3号方高剂量组),造模同时,用助孕3号浓缩干粉7.08g/kg/日灌胃(成人等效剂量2倍),用生理盐水配制,3ml/日,连续7天;D助孕3号方低剂量组(羟基脲+米非司酮+助孕3号方低剂量组),造模同时,用助孕3号浓缩干粉3.54g/kg/日灌胃(成人等效剂量)用生理盐水配制,2ml/日,连续7天;E空白对照组(生理盐水),用生理盐水灌胃,4ml/日,连续7天。观察孕鼠的一般情况、流产率等。灌服米非司酮24h后眼眶后静脉丛取血,后处死动物。运用ELISA法进行血清TGF-β1含量的检测。 结果:
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