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红树林生态系统孕育着丰富的多糖降解细菌。因此,对红树林中新型功能细菌的筛选及其遗传信息和生化功能的研究,有助于拓展对红树林碳循环过程的认知。本研究旨在通过纯培养手段获得红树林沉积物中新型多糖降解菌株资源,并结合基因组信息探索菌株中多种多糖的降解通路,最后通过原核表达验证、优化部分降解多糖基因的降解活性,以此揭示该菌株在红树林中的生态作用,为红树林碳循环过程的研究提供数据支持,也为寡糖制备提供新的生物工具。本文主要的研究结果如下:
(1)分离培养与鉴定研究。本文通过纯培养手段对漳州紫泥红树林、三亚河红树林自然保护区和亚龙湾青梅港红树林自然保护区沉积物中的微生物资源进行调查,共分离得到了119株细菌,其中从漳州紫泥红树林沉积物中分离得到一株新种细菌(ZWAL4003)。根据多相分类鉴定的结果,确定该菌株为弧菌属新种并将其命名为Vibrio ziniensisZWAL4003;
(2)代谢通路与生态功能研究。对V.ziniensisZWAL4003的基因组研究发现其具有丰富的碳水化合物酶资源,多样的代谢途径和运动能力。根据该菌降解褐藻胶、几丁质、纤维素、果胶、木聚糖、淀粉和肽聚糖的潜力预测并绘制出该菌对不同多糖降解的通路。该菌株的复杂多糖降解的体外实验结果表明其具有降解褐藻酸钠在内的7种复杂多糖的能力,与基因组预测结果相一致。此外,基因组和生化实验结果表明,V.ziniensisZWAL4003是红树林生态系统中潜在的固氮细菌和反硝化细菌;
(3)基因异源表达与酶学性质研究。本研究通过异源表达,对V.ziniensis ZWAL4003中的1条褐藻胶裂解酶序列alg1883进行了酶学性质探究、酶切作用形式及产物鉴定。结果表明,重组Alg1883(rAlg1883)的最适温度与最适pH分别为30℃和7.0。rAlg1883能够以内切的方式得到不饱和褐藻单糖和不饱和褐藻寡糖(?DPs2-5)。此外,rAlg1883在10℃和20℃下稳定性良好,表明rAlg1883在低温和常温下具有较强的稳定性,从而节约潜在的运输成本。
本文研究结果表明V.ziniensisZWAL4003是红树林生态系统碳循环与氮循环的重要参与者,加深了对弧菌属在多糖降解、固氮、反硝化等方面的生态功能的认知,同时表明红树林是新型细菌的潜在来源,为生物资源开发利用提供了参考。
(1)分离培养与鉴定研究。本文通过纯培养手段对漳州紫泥红树林、三亚河红树林自然保护区和亚龙湾青梅港红树林自然保护区沉积物中的微生物资源进行调查,共分离得到了119株细菌,其中从漳州紫泥红树林沉积物中分离得到一株新种细菌(ZWAL4003)。根据多相分类鉴定的结果,确定该菌株为弧菌属新种并将其命名为Vibrio ziniensisZWAL4003;
(2)代谢通路与生态功能研究。对V.ziniensisZWAL4003的基因组研究发现其具有丰富的碳水化合物酶资源,多样的代谢途径和运动能力。根据该菌降解褐藻胶、几丁质、纤维素、果胶、木聚糖、淀粉和肽聚糖的潜力预测并绘制出该菌对不同多糖降解的通路。该菌株的复杂多糖降解的体外实验结果表明其具有降解褐藻酸钠在内的7种复杂多糖的能力,与基因组预测结果相一致。此外,基因组和生化实验结果表明,V.ziniensisZWAL4003是红树林生态系统中潜在的固氮细菌和反硝化细菌;
(3)基因异源表达与酶学性质研究。本研究通过异源表达,对V.ziniensis ZWAL4003中的1条褐藻胶裂解酶序列alg1883进行了酶学性质探究、酶切作用形式及产物鉴定。结果表明,重组Alg1883(rAlg1883)的最适温度与最适pH分别为30℃和7.0。rAlg1883能够以内切的方式得到不饱和褐藻单糖和不饱和褐藻寡糖(?DPs2-5)。此外,rAlg1883在10℃和20℃下稳定性良好,表明rAlg1883在低温和常温下具有较强的稳定性,从而节约潜在的运输成本。
本文研究结果表明V.ziniensisZWAL4003是红树林生态系统碳循环与氮循环的重要参与者,加深了对弧菌属在多糖降解、固氮、反硝化等方面的生态功能的认知,同时表明红树林是新型细菌的潜在来源,为生物资源开发利用提供了参考。