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心肌的氧、营养物质和代谢产物的及时运送是心脏作功的基础，当心肌供血量明显减少或心脏作功负荷超过心肌最大供血能力时，就会因心肌相对或绝对缺血而引起心肌代谢功能障碍，严重时结构损伤。及时地恢复缺血心肌组织的血供，不仅能纠正缺血引起的心肌代谢障碍，而且可以使已发生可逆性结构变化的心肌恢复正常。但在实验研究和临床实践中均发现，在短时间心肌血供中断后一定时间内恢复血流，有时可致原缺血心肌发生较血流恢复前更严重的损伤，即缺血再灌注损伤。特别是随着临床冠状动脉溶栓术、经皮冠状动脉成形术、冠状动脉内扩张术、激光汽化等血管再通术和再造术的推广应用，强调防治再灌注损伤的发生具有重要的临床意义。心肌缺血再灌注损伤已越来越受到广大基础和临床工作者的高度重视，探索开发防治心肌缺血再灌注损伤的药物已成为研究的热点之一。目前尚缺乏防治心肌缺血再灌注损伤的特效中药，本课题通过制备体内缺血再灌注损伤心肌模型和体外心肌细胞缺氧再给氧损伤模型，对人参皂苷Re抗心肌缺血再灌注损伤的有效性及其细胞分子机制进行深入研究，为寻找安全有效的防治心肌缺血再灌注损伤中药成分提供实验依据。 1．人参皂苷Re对体外培养心肌细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用及其机制研究： 通过暂停体外培养心肌细胞的氧、营养供应3h，恢复氧、营养供应1h，建立缺氧-再给氧损伤模型，观察细胞形态学改变：模型组中可见细胞肿胀或缩小，有脱落细胞，搏动节律不规则，给予人参皂苷Re可减轻上述变化；人今息甘Re对产乌刀‘介九洲匕再俄金七或砚份保护作用的实马全研兜中文按蚕台盼蓝穿透法和MTT比色法测定心肌细胞活力:模型组中细胞活力降低，与正常组比较有显著差异，Re给药组可显著增加心肌细胞活力;测定心肌细胞培养液中LDH含量:模型组的细胞培养液中LDH漏出增多，Re给药组可抑制LDH的释放，稳定心肌细胞膜:心肌细胞ATP酶的测定:模型组心肌细胞Na+一K十一ATP酶和c扩气ATP酶的活性显著低于正常对照组，人参皂昔Re可提高Na+一K气ATP酶和c扩气ATP酶的活性;采用流式细胞术检测心肌细胞周期:缺氧一再给氧损伤导致培养的心肌细胞在G，峰前出现亚二倍体峰，同时G夕G，期细胞比例增加，GZIM期和S期细胞比例减少，给予人参皂昔Re可使细胞凋亡比例下降，处于GZ/M期和S期的细胞增多;心肌细胞的叮咤橙染色可见:模型组中有一些细胞己经发生凋亡和坏死，人参皂营Re给药组凋亡和坏死的细胞比例减少。 2.人参皂昔Re对在体心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究: 通过结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD)30min，复灌3h或24h，建立在体心肌缺血再灌注损伤模型，观察Re对再灌注损伤心肌血流动力学的影响:缺血再灌注组HR减慢，sBP、DBP、MAP、叹sP、士dp/dtmax明显降低，Re大剂量组LVSp、士dp/d tmax、SBP、DBp、MAP明显增加，Re小剂量给药组LvsP、+d n/dtmas、sBP明显增加;Re对再灌注损伤心肌血液流变性的影响:缺血再灌注组的全血粘度和血浆粘度均明显升高，Re给药组可使高、中、低切变率下的血液粘度和血浆粘度均下降;Re对再灌注损伤大鼠心肌酶学的影响:缺血再灌注组AST、LDH、CK一MB活性显著升高，Re给药组可抑制心肌AST、LDH、CK一MB的释放;心肌组织病理学观察:正常对照组心肌组织未见病理改变，缺血再灌注组心肌细胞核不规则，部分肌纤维变性肿胀，粒细胞浸润，Re给药组心肌组织结构损伤轻，心肌细胞间有少量炎细胞浸润:心肌组织超微结构观察:正常对照组细胞超微结构正常，缺血再灌注组基质肿胀，肌丝局灶性溶解、断裂，肌原纤维排列紊乱，线粒体增多肿胀，大小不等，有较多空泡形成，细胞核变形，核染色质凝集成块并边集，核内有空洞样变，Rc给药组心肌少、今扁.普Re对.护忆习t匆卜血J不淮胜.扭份保护作用的宾脸布开究中文摘要细胞超微结构的改变轻微:Re对缺血再灌注损伤心肌缺血范围的影响:给予人参皂普Re可明显缩小大鼠心肌缺血再灌注后的梗死范围。 3.人参皂昔Re对心肌缺血再灌注损伤产生保护作用的细胞分子机制研究: 通过建立大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型，观察Re在防治心肌缺血再灌注损伤中氧化应激的作用:采用化学比色法测定心肌组织和血清中soD活性和MDA含量，再灌注组心肌组织和血清中SOD的活性与正常对照组比较显著下降，而MDA的含量显著升高，人参皂普Re可升高SOD的活性，降低MDA的水平;通过流式细胞术测定各组心肌细胞中ROS的变化，缺血再灌注组心肌细胞中ROS含量增多，与正常组比较差异显著，人参皂普Rc可降低ROS的升高幅度;采用双波长荧光光度法，测定大鼠心肌细胞内[c az+]可见:缺血再灌注组心肌细胞内[C扩勺明显高于正常对照组，人参皂昔Re可使心肌细胞内[C扩勺下降，与缺血再灌注组比较有显著性差异;通过放射免疫方法观察人参皂普Re对心肌组织IL。8含量的影响:模型组IL一8含量明显高于正常对照组，人参皂昔Re给药组可降低心肌组织IL一8;通过化学比色法测定心肌组织MPO活性:缺血再灌注组MPO的酶活性明显高于正常对照组，人参皂营Re可使MPO活性下降;通过免疫组化、原位杂