microRNA是近十多年来发现的一类长约19-25nt的内源小分子非编码RNA，预测是由约70nt左右的茎环结构的前体加工而来。它们大部分在进化上很保守。目前已经鉴定出人类的microRNA有700多个，而我们确切知道其功能的还很少。microRNA的作用机制一般有两种：在植物中，microRNA与蛋白编码的mRNA的一段序列几乎完全匹配，导致mRNA被剪切并降解；在动物中，目前发现的miRNA大多匹配在靶标基因的3UTR，并且是通过不完全的配对影响mRNA的稳定性并抑制其翻译。 人类中的microRNA与癌症有着密切的关系。研究发现正常组织与癌变组织中microRNA的表达量存在明显差异，使得人们开始关注microRNA在癌症中的功能。microRNA—21在神经胚细胞瘤，神经胶质瘤，直肠癌，肺癌，乳腺癌及胰腺癌等多种癌症中都过高表达，并在多种癌症细胞中下调抑癌基因PDCD4的表达，它还与细胞的增殖，浸入与转移能力相关。近期有研究显示，microRNA—21在早期鳞状上皮宫颈癌中的表达相对正常宫颈组织细胞上调，并且miR—21是宫颈癌HeLa细胞中表达量最高的microRNA之一，但microRNA—21在HeLa细胞中的功能还未有研究涉及到。 为了探索microRNA—21在HeLa细胞中的功能与作用机制，我们在细胞中转染anti—miR—21抑制内源的microRNA—21，然后用MTT以及结晶紫染色法检测细胞的增殖和生长状况。结果显示，抑制内源miR—21会对HeLa细胞的增殖产生明显的抑制作用，在抑制细胞增殖的同时还可能促进细胞凋亡。我们还用荧光素酶双报告载体系统，在HeLa细胞内检测了miR—21对Pdcd4-3UTR预测靶标位点的作用。结果证明在HeLa细胞中miR—21能够直接作用于Pdcd4-3’UTR并抑制荧光素酶的表达，并且仅预测位点的18bp序列片段也具有抑制的功能。这样抑制的效应会随着我们对3UTR靶标区域的突变而回复，说明抑制效应确实是由靶标位点序列引起。 最后，我们用western blot检测了anti—miR—21转染细胞后PDCD4蛋白的表达量。western的结果显示抑制内源miR—21之后会上调PDCD4蛋白的表达。PDCD4蛋白是细胞中重要的抑癌基因，有研究显示这个基因可以抑制蛋白质的合成。因此，抑制内源miR—21使得PDCD4表达上调，也从某种程度上支持了miR—21在HeLa细胞中作为致癌基因的可能性。 综上所述，本论文初步研究了miR—21在HeLa细胞中的功能以及作用机制。这将miR—21作为人类中致癌基因的普遍性向一种新的癌症细胞推进了一步，并可为以后在宫颈癌细胞中miR—21的分子机制的研究提供有价值的参考。