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目的:儿童呼吸道感染在临床病例中日益猖獗,腺病毒是重要病原体之一,除此之外,腺病毒还导致小儿肺炎,尤其是6个月至2岁的婴幼儿腺病毒肺炎最为严重,感染主要是以3、5、7型为主.华北、东北及西北于冬季都有过较大规模的流行,病情极为严重,住院病人病死率高达5％-25％.因此,对腺病毒进行特异性诊断和早期预防具有重要意义.六邻体是腺病毒主要的结构蛋白,能够刺激机体产生相应的抗体,抑制病毒体构象的改变,从而中和病毒体.六邻体的中和抗原决定簇主要存在于L1、L2区,其中L1有六个超变区,L2有一个超变区,每个超变区的基因序列已经明确,因此可以对该区进行克隆和表达,这对今后研制高效、无毒的腺病毒基因工程疫苗具有重要意义.方法:将腺病毒感染Hela细胞后提取病毒DNA,用PCR方法扩增六邻体L1、L2基因,将得到的基因片段定向克隆到克隆载体pUC19质粒中,对克隆的片段进行DNA测序鉴定.然后切下目的片段,连接到表达载体pQE31上,转化到感受态大肠杆菌DH5α中,经酶切鉴定后筛选正确重组质粒pQE31hexon,最后把它转化到M15菌中,转化菌株获得六邻体L1、L2基因功能.转化菌株经IPTG诱导后表达六邻体L1、L2蛋白,对所表达的蛋白用SDS-PAGE进行分析.应用单因素变量法对诱导表达的各个变量(诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度、初始菌浓度)进行优化,使蛋白质表达达到最大值.结果:从Hela细胞中提取得到完整的36kb的腺病毒核酸;PCR扩增得到1.4kb大小的六邻体L1、L2片段;酶切鉴定和核甘酸序列测定结果证明重组质粒的正确性和外源基因序列的可靠性;诱导表达产物经SDS-PAGE检测在相对分子量52kD处有特异的蛋白带.蛋白表达的最佳条件为温度37℃,初始菌浓度OD<,600>为0.5,IPTG终浓度为0.06mM,诱导时间为4小时.结论:该实验成功地克隆和表达了六邻体L1、L2基因,获得了基因工程重组的六邻体蛋白,为制备腺病毒基因工程疫苗奠定了基础.