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环状RNA(circRNA)是一类内源性非编码RNA,具有ceRNA(竞争性内源RNA)功能。本课题组前期研究表明miR-26a促进奶山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)增殖,但其具体的分子调控机制尚不清楚。本研究根据实验室前期构建的circRNA文库发现circRNA3669在奶山羊容受前期子宫内膜组织中特异性表达,且生物信息学预测发现,circRNA3669可作为ceRNA与miR-26a结合。因此,本研究推测circRNA3669可作为ceRNA通过miR-26a调控相关靶基因的表达,进而调控EEC增殖和凋亡。本试验以EEC为研究对象,通过干扰和过表达策略,利用stem-loop RT-qPCR、RT-qPCR、双荧光素酶活性检测系统、免疫组化、Western blot、CCK-8、EdU、细胞凋亡等检测技术,研究EEC中circRNA3669、miR-26a和RCN2之间的调控关系,以及circRNA3669和RCN2对EEC的调控作用,及其对MAPK信号通路和BCL2、BAX、Caspase3等相关凋亡蛋白的影响。主要研究结果如下:1.circRNA3669可作为ceRNA吸附miR-26a,并抑制miR-26a的活性研究发现circRNA3669在奶山羊子宫内膜容受期相对容受前期的表达量极显著下调,且双荧光素酶检测结果显示miR-26a显著下调WT-circRNA3669的双荧光素酶活性,这表明circRNA3669能够吸附miR-26a。在EEC中,干扰circRNA3669后miR-26a的表达量极显著上调,过表达circRNA3669后miR-26a的表达量极显著下调,miR-26a inhibitor处理EEC后circRNA3669的表达量极显著上调。这些结果表明circRNA3669可作为ceRNA吸附miR-26a,并抑制EEC中miR-26a的活性。2.circRNA3669作为ceRNA通过吸附miR-26a调控RCN2的表达双荧光素酶活性检测结果显示,miR-26a显著下调了WT-RCN2-3′UTR的双荧光素酶活性,初步表明miR-26a靶向调控RCN2基因。miR-26a inhibitor显著上调EEC中RCN2mRNA和蛋白的表达量;miR-26a极显著下调RCN2蛋白表达量,进一步表明RCN2是miR-26a的靶基因之一。RCN2在奶山羊子宫内膜容受前期的表达量显著高于容受期。另外,在EEC中干扰circRNA3669后RCN2蛋白表达量显著下调,过表达circRNA3669后RCN2蛋白的表达量显著上调。以上结果表明circRNA3669可作为ceRNA通过吸附miR-26上调RCN2在EEC中的表达。3.circRNA3669和RCN2通过MAPK信号通路抑制EEC凋亡本研究分别过表达circRNA3669,干扰(si-)和过表达RCN2处理EEC,利用EdU、CCK-8、Western blot和细胞凋亡检测等技术,检测circRNA3669和RCN2对EEC增殖凋亡的影响。EdU和CCK-8检测结果显示:过表达circRNA3669后极显著增加了EEC的细胞数,干扰RCN2后极显著降低了EEC的细胞数,过表达RCN2后极显著增加了EEC的细胞数。另外,细胞凋亡检测发现circRNA3669和RCN2均抑制了EEC凋亡。Western blot检测结果显示circRNA3669和RCN2都上调BCL2和p-ERK/ERK的表达水平,下调BAX、Caspase3和p-JNK/JNK、p-P38/P38的表达水平。结果表明circRNA3669和RCN2均通过调控MAPK信号通路,抑制EEC凋亡。综上所述,本试验研究了在奶山羊子宫内膜容受期与容受前期差异表达的circRNA3669,并揭示了circRNA3669作为ceRNA通过吸附miR-26a调控RCN2在EEC中的作用机制,为进一步研究奶山羊子宫内膜上皮细胞提供试验依据。