【摘 要】
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该研究利用RNA干涉的方法鉴定了水稻CMS-WA候选恢复基因的功能.该研究获得的主要结果如下:1)通过对星A(不育系)×ZSP5(恢复系)杂交F代(简称复育系)进行分子标记检测,获得了基
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该研究利用RNA干涉的方法鉴定了水稻CMS-WA候选恢复基因的功能.该研究获得的主要结果如下:1)通过对星A(不育系)×ZSP5(恢复系)杂交F<,2>代(简称复育系)进行分子标记检测,获得了基因型为rf3rf3Rf4Rf4的个体,用于Rf4基因的干涉实验.建立了适合此种籼稻品系的、农杆菌介导的高频再生遗传转化体系.2)将候选的Rf基因(Rf3-GNT、Rf4-PK、Rf4-PPRc)序列通过正向和反向两次装载,装入了两种RNA干涉载体.实验证明:两种载体在大肠杆菌和农杆菌中都能稳定地遗传.3)通过农杆菌介导的遗传转化,获取了干涉载体的转化植株.其中包括转Rf4-PK、Rf4-PPRc干涉载体的籼稻植株,转Rf3-GNT、Rf4-PK、Rf4-PPRc干涉载体的粳稻品种中花11.对T<,0>代植株的PCR分析和Southern杂交检测证明目的片段已经整合进水稻基因组.4)对Rf3-GNT、Rf4-PK、Rf4-PPRc三个候选恢复基因进行了表达特异性分析,结果表明:Rf4-PK主要在根和穗表达,其它两个基因主要在幼穗表达.5)转基因植株目的基因的RT-PCR分析表明,部分转化植株目的基因mRNA表达量降低或者完全被抑制.进一步的Northern杂交检测发现,三个目的基因均属于低表达量基因.6)Rf3-GNT、Rf4-PK、Rf4-PPRc干涉载体的转化体均显示了不同程度的花粉不育.
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