论文部分内容阅读
磷酸乙醇胺甲基转移酶(PEAMT)是合成磷酸胆碱的关键酶,磷酸胆碱脱磷酸后可形成胆碱,胆碱经两步连续反应合成甜菜碱。甜菜碱是一种小分子、非毒性的渗透调节物质,甜菜碱的积累不但能降低细胞渗透势,增强吸水能力,以维持细胞膨压,提高植物对逆境的适应能力,还能稳定酶、复合蛋白(如PSⅡ外周多肽)等生物大分子的结构与功能,保持膜的有序态,在细胞内起渗透保护作用。内源胆碱不足将影响甜菜碱的生物合成。克隆PEAMT基因,通过基因工程手段将该基因转入到植物中,提高转基因植物胆碱的含量,从而提高甜菜碱含量,对提高植物的抗盐能力有着非常重要的意义。
本文克隆了辽宁碱蓬PEAMT基因,并将该基因转入到烟草中,对转基因烟草的胆碱及甜菜碱含量进行了分析。主要结果如下:
1、用RT-PCR和RACE技术获得了辽宁碱蓬的PEAMT cDNA全序列。PEAMT cDNA全长1688bp,5’端非编码区34bp,3’端非编码区169bp,开放阅读框架1485个核苷酸,编码一个由495个氨基酸构成的多肽,与日本碱蓬、甜菜、菠菜、大洋洲滨藜等同科植物PEAMT的氨基酸序列同源性很高,分别为99.6%,84.82%,85.43%,84.29%。
2、克隆了PEAMT基因的编码区,构建了其植物表达载体pBI121-PEAMT,冻融法将质粒导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404,获得工程菌LBA4404-pBI121-PEAMT。
3、农杆菌介导法将PEAMT基因导入烟草(Nictiana tabacum L.cv.89),获得卡那霉素抗性植株,PCR检测获得转基因阳性植株。用化学比色法测定转基因植株中胆碱、甜菜碱含量,结果表明转基因烟草的胆碱、甜菜碱含量普遍高于对照。过量表达辽宁碱蓬PEAMT基因可以提高转基因植物中胆碱的含量,从而提高其甜菜碱含量。