噬菌体展示青霉素G酰化酶大肠杆菌-枯草杆菌通用表达载体的构建

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革兰氏阴性菌Alcaligenes faecalis的PGA已在噬菌体表面获得展示,并证实有活力,革兰氏阳性菌来源的PGA是否能在噬菌体表面成功展示,迄今尚未见报道.将包含信号肽和琥珀终止密码子UAG(Amber)的完整巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶基因克隆到噬菌粒pSurfscript,通过引入的11肽连接青霉素G酰化酶的C末端与噬菌体外壳蛋白gp3的N末端.以构建的噬菌粒pSurfpga转化具有琥珀突变的大肠杆菌XL1-blue,以辅助噬菌体M13K07超感染,进行青霉素G酰化酶基因的表达和在噬菌体表面的展示.用NIPAB法测得平均活力为2.5×10<-12>mU/cfu.这是首次在噬菌体表面展示出有活力的巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶,为利用噬菌体展示技术进行青霉素G酰化酶突变库的筛选奠定了基础.
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