【摘 要】
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目前大熊猫人工授精的受孕率偏低,使得人工圈养大熊猫的繁殖变得十分困难,及时的开展大熊猫精液品质的研究及其冷冻保存技术研发,对于维持秦岭大熊猫种群数量,建立秦岭亚种种质资源库,走出大熊猫濒危困境具有十分重要的意义。冷冻过程中精子遭受的氧化损伤是影响冻精质量的主要因素,在精子冷冻保存液中添加抗氧化剂,已成为提高家畜冷冻精液品质的重要方法。本试验采用ELISA等技术,通过对秦岭大熊猫精浆指标检测的基础上
【基金项目】
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陕西省重点项目-农业领域基金（编号:2018ZDXM-NY-036）；
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目前大熊猫人工授精的受孕率偏低,使得人工圈养大熊猫的繁殖变得十分困难,及时的开展大熊猫精液品质的研究及其冷冻保存技术研发,对于维持秦岭大熊猫种群数量,建立秦岭亚种种质资源库,走出大熊猫濒危困境具有十分重要的意义。冷冻过程中精子遭受的氧化损伤是影响冻精质量的主要因素,在精子冷冻保存液中添加抗氧化剂,已成为提高家畜冷冻精液品质的重要方法。本试验采用ELISA等技术,通过对秦岭大熊猫精浆指标检测的基础上,探寻精浆指标与秦岭大熊猫精液品质的相关性;分析海带多糖、枸杞多糖和白藜芦醇对大熊猫冷冻精液常规质量指标与线粒体活性等影响,筛选出抗氧化剂添加最佳剂量;观察大熊猫精子冷冻-解冻后超微结构变化,为建立秦岭大熊猫精液超低温冷冻保存技术和提高人工授精的受孕率提供试验数据。试验结果如下:1.采集4只年龄为12～17岁的雄性秦岭大熊猫精液,其鲜精的平均精子活率、质膜完整性和顶体完整性分别为82.75±5.74%、81.04±4.35%以及47.10±8.11%,Panda B和Panda C的精子活率、质膜完整性和顶体完整性显著高于Panda A和Panda D;精浆指标分析结果表明,精浆中酸性磷酸酶和Zn的含量与精子活率、质膜完整性和顶体完整性呈显著正相关;Panda D精浆中ROS含量的增加对精液品质呈显著负相关。2.通过制作冷冻-解冻后大熊猫精子电镜样本,使用扫描和透射电镜技术观察超低温冷冻对大熊猫精子的影响,研究发现超低温冷冻保存后主要对精子头部、颈部造成损伤。3.在冷冻前添加三种抗氧化剂于精液中,通过ELISA等技术进行检测,结果表明,50μM、100μM白藜芦醇和2.0 mg/m L枸杞多糖添加组显著增加冻精解冻后的精子质量和抗氧化能力,且100μM白藜芦醇添加组显著下调ROS的含量;1.0 mg/m L海带多糖、4.0 mg/m L枸杞多糖和联合添加组均可以显著提高精子的抗氧化能力,且联合添加组显著上调精子活力;2.0 mg/m L、4.0 mg/m L枸杞多糖显著上调了精子顶体蛋白酶的活性。白藜芦醇、海带多糖、枸杞多糖通过增加抗氧化酶活性并抑制冷冻过程中ROS的产生,显著提高精子质量。其中50μM白藜芦醇和2.0 mg/m L枸杞多糖在冷冻保护过程中对精子的保护效果最好。综上所述,本研究结果表明,超低温冷冻对大熊猫精子结构造成一定的损伤,通过冷冻保护剂中添加2.0mg/m L枸杞多糖或添加50μM白藜芦醇可以减少大熊猫精液冷冻保存过程中的氧化损伤,提高大熊猫精液冷冻保存后的精子质量。
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