【摘 要】
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本试验以苹果属小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)为试材,利用蛋白质组学研究方法,研究了在缺铁胁迫下小金海棠根部蛋白质表达模式的变化情况,通过质谱测定了5个
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本试验以苹果属小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)为试材,利用蛋白质组学研究方法,研究了在缺铁胁迫下小金海棠根部蛋白质表达模式的变化情况,通过质谱测定了5个发生变化的蛋白点,根据肽指纹谱鉴定了其中的2个蛋白,都属于S-腺苷甲硫氨酸(SAMS)合成酶家族。利用RACE方法克隆了小金海棠的MxSAMS基因,主要结果如下: 经过0μM和4μM铁水平处理,小金海棠根部蛋白SDS-PAGE电泳分析,没有发现特异条带;但0μM铁处理第10天的叶片中一条大约40KDa的蛋白加强表达,在4gM铁处理叶片中,这个40KDa的蛋白在2-8天下调,到第10天恢复,另外一条42KDa左右的蛋白在第4-8天加强表达,到第10天恢复。这些结果表明,低铁和缺铁处理引起了小金海棠叶片蛋白含量和成分的变化。 通过对双向电泳图谱分析,小金海棠根部蛋白表达模式发生变化,在不同的处理时间,不同的蛋白表现出上调或下调作用,但没有发现特异蛋白的表达。根据2-DE图谱,选取了5个蛋白点进行质谱测定,根据得到的肽质量指纹谱(PMF)检索,鉴定了其中的2个蛋白,它们都属于S-腺苷甲硫氨酸合成酶家族,具有催化ATP和甲硫氨酸(Met)合成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的作用。由于他们的PMF不同,推测他们是同一个SAM家族的同源蛋白,行使不同的功能。另外3个蛋白没有得到鉴定,可能是未知蛋白。 克隆得到小金海棠S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因(MxSAMS),cDNA全长1479bp,ORF1176bp,编码一个392个氨基酸残基的蛋白质,具有SAMS家族的结构特征,分子量约为42.99KDa,等电点为5.58,属于酸性蛋白。Southern杂交结果表明,小金海棠基因组中存在MxSAMS基因,并且是单拷贝基因;Northern杂交结果显示,缺铁(0μM)条件下,MxSAMS基因表达加强,从第2天可持续到第8天,到第10天恢复到原来水平。
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