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减蛋综合征病毒(Egg drop syndrome virus, EDSV)主要引起鸡减蛋综合征,临床表现为产蛋鸡产薄壳蛋或无壳蛋,产蛋率严重下降。自1976年荷兰学者Van Eck首次报道以来,世界各地都分离到减蛋综合征病毒毒株。各毒株间毒力差异大,宿主范围广泛,可在机体内长期繁殖,与Ⅰ群和Ⅱ群禽腺病毒之间无交叉反应,具有独特的抗原性和生物学特性。我国是养禽大国,禽病的发生和流行影响着养禽业的发展,故了解EDSV基因组的结构特点和建立一种快速、特异的诊断技术显得尤为重要。本研究以EDSV NE4株为基础材料,经过鸭胚增毒、提取DNA,并以此为模板,用Premier5.0软件根据减蛋综合征病毒(EDSV-76)Duck adenovirus A株的全基因序列(GenBank序列号AC000004),设计22对引物,用PCR方法对EDSV-76病毒中国株NE4株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定。用DNAStar分析软件对各片段的测序结果进行拼接,并将该序列与GenBank中已登录的相应的序列进行同源性比较分析,并用六邻体蛋白构建了进化树。结果显示,NE4株基因组序列全长33214bp,GC含量为43%,与国际标准株AV-127相比核苷酸序列同源性为99.6%。碱基的插入或缺失主要集中在非编码区,在100K蛋白编码区距羧基端十分之一处插入了一个碱基C,其ORF编码696个氨基酸,而AV-127株100K蛋白编码709个氨基酸,预计其发挥功能的基团在N端。蛋白同源性分析表明,EDSV NE4株主要蛋白与腺病毒OAV(Ovine adenovirus D)和BAV(Bovineadenovirus D)具有较高的同源性,有些蛋白与SAV(Snake adenovirus)腺病毒有较高的同源性,而与CELO的同源性较低,提示NE4株与禽腺病毒Ⅰ群在血清学以及基因结构上存在较大差异,进化分析也显示了此特性。此工作为进一步了解EDSV基因组的结构特点及其与其它腺病毒的同源关系,也为EDSV腺病毒的研究和载体的构建提供清晰的分子生物学背景目前,检测EDSV的方法主要有血凝抑制试验(HI)、琼脂扩散(AGP)试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、PCR和免疫胶体金等检测方法,随着分子生物学技术的不断发展和成熟,作为新生的分子生物学检测方法,环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification, LAMP)应运而生,并成为快速诊断EDSV的有力手段。本研究根据GenBank登录的EDSV-76六邻体基因的保守区设计三对LAMP引物,建立一种高效、快速、高特异性的EDSV LAMP检测方法。优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证。结果显示,LAMP检测方法扩增EDSV基因呈特征性梯状条带,显色反应呈绿色荧光。该方法检测EDSV灵敏度高,是普通PCR的10倍,可检测到60个拷贝的基因组DNA;特异性强,与鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡胚致死孤儿病毒(CELO)无交叉反应。重复性好,稳定性高,可经济、有效地在基层和实验室中进行减蛋综合征病毒的检测。