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目的: 利用花色素苷为主要活性成分研发出一种具有保健功能的饮品,并探讨该饮料对正常和高脂膳食大鼠的抗氧化和降血脂作用,以及对正常和注射环磷酰胺致免疫抑制大鼠的免疫调节功能的影响,为花色素苷在保健食品及医药行业的应用提供参考。 方法: 1.通过Lg(34)正交试验,确定饮料最佳配方;利用高效液相色谱法(HPLC)分析光照、温度和金属离子对饮料稳定性的影响,并确定最佳灭菌方式。 2.饮料安全性评价:①最大耐受量实验:24h内以最大体积(0.4 mL/10 g体重)的饮料和饮用水分别给实验组和对照组小鼠灌胃3次,连续观察14 d,记录动物反应情况。②60天喂养实验:每天用饮料和饮用水分别给实验组和对照组小鼠灌胃,观察小鼠外观、体征、食欲、大小便、精神状态、行为活动等一般状况;实验结束后测定血液学和生化各项指标;取小鼠的脑、心、肝、脾、肺、肾进行称重并计算其脏器系数,并作病理切片检查。 3.饮料对正常和高脂膳食大鼠的抗氧化与降血脂作用研究:SD大鼠36只,随机分为正常饲料组和高脂饲料组,每组再随机分为3小组,每组6只,分别以饮用水、蓝莓饮料和花色素苷饮料连续喂养6周。喂养结束后,分离血清,测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及血清和组织中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)含量。 4.饮料对正常和注射环磷酰胺致免疫抑制大鼠的免疫调节作用研究:SD大鼠36只,随机均分为正常组和环磷酰胺组,每组再随机分为3小组,每组6只,分别以饮用水、蓝莓饮料和花色素苷饮料连续喂养6周。环磷酰胺组大鼠在实验结束的最后两天腹腔注射环磷酰胺(60 mg/kg体重),正常组腹腔注射等体积的生理盐水。实验结束,摘取脾脏和胸腺称其湿重并计算湿重指数,生化方法测定脑、肝、脾、肾、胸腺和腹腔巨噬细胞(PMφ)内乳酸脱氢酶(LDH)和酸性磷酸酶(ACP)的活力,并进一步观察PMφ吞噬中性红的能力,MTT法测定脾细胞增殖能力。 结果: 1.饮料最佳配方为白砂糖12%、柠檬酸0.3%、柠檬酸钠0.05%、花色素苷提取物1%。饮料在日光下的稳定性最差,其次是室内自然光,避光条件下花色素苷含量损失最小;且花色素苷在20℃以下非常稳定,但随温度的升高和加热时间的延长,花色素苷含量减少很快;金属离子K+、Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+和Cu2+等对花色素苷稳定性无影响;同时确定了最佳灭菌方式为超高温瞬时灭菌。 2.饮料安全性评价结果显示,该饮料的最大日耐受量>120mL/kg;经60天喂养后,与正常对照组相比,雄性实验组小鼠体重显著上升(P<0.05),主要脏器系数无显著差异;血液学指标和血液生化指标以及主要脏器病理学检查,也未发现异常。 3.高脂膳食大鼠在血脂升高的同时,血清和肝、肾总抗氧化能力(T-AOC)降低,抗氧化酶SOD和GSH-Px活性显著下降,MDA含量显著增加。摄入花色素苷饮料后,正常大鼠HDL-C水平显著升高,SOD(血清、肝、肾)和GSH-Px(肝、肾)活力显著增强,MDA(血清、肝、肾)水平显著降低。高脂膳食大鼠血清中TC、TG及LDL-C水平明显降低;T-AOC(血清、肝、肾)、SOD(血清、肝、肾)及GSH-Px(血清、肾)活力显著增强,MDA(血、肝)水平显著降低。 4.花色素苷饮料能明显增加正常大鼠脾脏湿重,遏制环磷酰胺所致的脾脏和胸腺组织的萎缩及脏器系数的减小;促进正常大鼠脾细胞的增殖,对环磷酰胺造成的脾细胞增殖受阻产生遏制作用。不仅使正常大鼠PMφ中LDH活力显著提高,还可对环磷酰胺造成的ACP和LDH活力的下降产生遏制,从而对大鼠PMφ有激活作用;给予花色素苷饮料6周后,注射环磷酰胺组大鼠肾脏和胸腺组织细胞中LDH活力的下降显著低于环磷酰胺对照组,且肝、脾、肾和胸腺组织中ACP活力的下降较环磷酰胺对照组也显著降低。 5.两种饮料的降血脂效果相当,花色素苷饮料的免疫调节作用强于蓝莓饮料,而抗氧化作用略低于蓝莓饮料。 结论: 1.饮料安全无毒,适宜于低温避光条件下储存。 2.饮料可降低高脂膳食大鼠胆固醇含量,提高抗氧化酶活力,降低脂质过氧化物的产生,从而起到抗氧化和调节血脂代谢的作用。 3.饮料可激活巨噬细胞,增强其吞噬功能,增强淋巴细胞的增殖能力,可抑制环磷酰胺的免疫抑制作用,对机体具有免疫调节功能。