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保幼激素(juvenile hormone,JH)是调控昆虫发育、变态与生殖的重要激素之一,但是有关JH调控昆虫生殖的分子机制并不清楚,报道也不多。飞蝗(Locustamigratoria)是我国的重要农业害虫,也是不全变态昆虫的一个代表种。根据之前的研究结果,雌性飞蝗的生殖有三个代表性的特点:一是飞蝗的卵黄生成(vitellogenesis)和卵子发生(oogenesis)主要由JH调控;二是飞蝗的卵小管属于无滋式(panoistic),即卵小管没有滋养细胞,卵母细胞发育为成熟卵子所需的营养主要由脂肪体提供;三是飞蝗两个卵巢中各约40个卵小管中的卵呈现周期性同步成熟,即在每个促性腺周期内,仅每个卵小管中的首卵成熟。本论文研究的中心问题是:JH受体及其下游的一些转录因子是否影响飞蝗的卵黄生成和卵子发生?是否直接调控飞蝗卵黄原蛋白基因(Vitellogenin, Vg)的表达?以及相关的分子调控机制是什么? 本研究首先采用早熟素(precocene)抑制雌性飞蝗咽侧体的活性,阻止内源JH的合成,然后利用JH类似物(Methoprene)处理,获得了JH诱导的基因表达谱,包括455个上调基因和314个下调基因。JH上调的基因中包括转录因子Krüppel-homolog1(Kr-h1)、Fushi tarazu-F1(FTZ-F1)和hormone receptor39(HR39)等。根据前期研究结果和JH诱导的基因表达谱,本论文研究选择了JH受体(Methoprene-tolerent,Met)、Met的功能复合体steroid receptor co-activator(SRC,又称为Taiman或FISC)、Kr-h1、HR39、FTZ-F1、E75开展了进一步研究。对Met、SRC、Kr-h1、FTZ-F1或HR39进行RNA干扰,能够显著抑制飞蝗的Vg转录、卵泡细胞发育、卵母细胞成熟和卵巢生长。为了确定这些受体或转录因子是否直接调控Vg的表达,通过RACE确定并克隆飞蝗VgA和VgB的5端启动子不同片段到荧光素酶报告系统质粒pGL4.10中,同时克隆并体外表达了飞蝗的Met、SRC、Kr-h1和HR39,利用果蝇S2细胞及哺乳动物的293T细胞进行双荧光素酶检测,发现Met/SRC或Kr-h1不直接启动Vg的转录,因此,Met、SRC和Kr-h1在飞蝗卵黄生成和卵子发生中发挥重要作用,但它们并不直接调控Vg的转录。对FTZ-F1和HR39的RNA干扰实验表明,飞蝗的Vg转录、卵泡细胞发育、卵母细胞成熟和卵巢生长也受到显著影响,但表型缺陷不如Met、SRC或Kr-h1等基因RNA干扰后的明显。对飞蝗VgA和VgB基因的上游调控区序列分析,发现存在与FTZ-F1和HR39潜在结合的DNA元件,暗示FTZ-F1和HR39可能与Vg上游调控区结合而直接调控Vg的表达。