在本研究中，我们拟通过芯片分析microRNA在正常和肥厚心肌中的表达变化，结合生物信息学预测，寻找和明确microRNA参与心肌肥厚的线索；利用mRNA功能研究方法，确认microRNA对心肌肥厚的调控作用，并对这种调控作用的机制进行初步研究，为阐明microRNA在心脏发育、心肌肥厚和心律失常等心脏生理和病理生理过程中的功能作用提供新的理论依据，为心血管疾病防治提供新的思路和治疗策略。 研究目的： （1）采用腹主动脉部分缩窄术，制备大鼠心肌肥厚模型。 （2）利用芯片技术寻找在肥厚的心肌组织中特异表达的microRNA（3）该特异性的microRNA对大鼠的胚胎心肌细胞（Hgc2）的影响（4）探讨该特异性的microRNA导致心肌肥厚的机制 方法:（1）20只雄性SD大鼠，体重180～210g，随机分成正常组5只、假手术组5只和模型组10只。分离腹主动脉和肾动脉后，在肾动脉上方约1cm处，将7号注射针头与腹主动脉一起结扎，然后抽出针头。7周后处死大鼠，取出心脏并解剖，计算HW/BW、LVW/BW，并制作病理切片，HE染色，光镜下观察组织形态和纤维化程度。 （2）在7周后取出肥厚的心尖组织，用Trizol法提取心肌组织RNA，采用芯片技术检测miRNA的表达，并找到特异性表达的miRNA，随后通过miRNA荧光定量PCR试剂盒证实该miRNA确实在正常和肥厚的心肌组织中差异表达。 （3）构建表达该特异性microRNA的质粒载体，以Mock为对照，转染大鼠的胚胎心肌细胞（Hgc2）；大鼠的胚胎心肌细胞（Hgc2）加AngⅡ（10-6mol/L）孵育48小时后，检测心肌细胞直径，采用miRNA荧光定量PCR试剂盒对该特异性的miRNA进行定量分析。 （4）将表达该特异性microRNA的质粒载体和Mock对照分别转染大鼠的胚胎心肌细胞（Hgc2），通过Real-timePCR的方法检测正常和肥厚的心肌细胞中β-myosin，α-actin，ANF及BNF基因的表达情况。采用免疫细胞化学的方法检测细胞骨架蛋白α-actinin的表达情况。用AnnexinV-PE试剂盒检测Hgc2细胞的凋亡情况。 （5）用生物信息学的方法预测miR-350的靶基因是JNK和MAPK14。在过表达miR-350的Hgc2细胞中，用Westernblotting的方法检测靶基因JNK和MAPK14的蛋白表达；用RT-PCR的方法检测mRNA的表达。同时，我们采用免疫细胞化学的方法观察受JNK和MAPK14调节的下游基因NFATc的转核情况。并且构建了针对MAPK14基因的shRNA表达质粒，转染Hgc2细胞后，观察细胞形态的变化，并检测MAPK14基因的蛋白和mRNA水平的变化。 实验结果： （1）与正常组相比，造模7周后，模型组IVSTd（2.40±0.03vs1.87±0.21，mm、LVPWTd（2.52±0.24vs1.77±0.17，mm）和LVDd（6.83±0.28vs4.50±0.19，mm）均有显著差异（P<0.01），而假手术组三个指标均无明显变化（P>0.05）；解剖发现，模型组心脏明显大于正常组，左心室增厚显著。病理结果显示，模型组心肌细胞直径增大，细胞排列不整齐、间质纤维化明显。 （2）芯片结果分析发现miR-350在心肌肥厚的模型组表达量明显高于对照组，实时荧光定量PCR也证实miR-350在心肌肥厚的模型组表达量明显高于对照组，与芯片结果一致；而实时荧光定量PCR结果显示miR-350在AngⅡ诱导后的Hgc2细胞中与非诱导的Hgc2细胞中的表达量相比，并没有出现显著的变化。 （3）过表达miR-35072小时后，实时定量PCR证实心肌肥厚的标志性基因β-myosin、α-actin、ANF及BNF，均出现上调。免疫细胞化学的方法检测细胞骨架蛋白α-actinin，也出现明显的增加。用AnnexinV-PE凋亡试剂盒检测，发现心肌细胞出现部分凋亡。 （4）通过生物信息学的方法预测出miR-350的靶基因是JNK和MAPK14。 （5）通过Western blotting的方法证实过表达miR-350的Hgc2细胞中，其靶基因JNK和MAPK14的蛋白表达水平下降，而mRNA水平则没有变化。同时发现，转染miR-350后，由JNK和MAPK14调节的NFATc的转核明显增多。Sh-MAPK14质粒转染后，MAPK14基因的蛋白和mRNA水平均出现下降，并且细胞出现了凋亡，同时伴随细胞肥大，但效果不如miR-350显著。 结论: （1）肥厚与正常的心肌组织相比，miRNA表达存在差异。 （2）在大鼠胚胎的心肌细胞Hgc2细胞中，miR-350介导心肌细胞肥厚。 （3）m1R-350的靶基因JNK和MAPK14共同参与miR-350调控的心肌肥厚。