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背景:近年来,自体脂肪移植(Autologous fat graft,AFT)在整形美容外科发挥日益重要的作用,作为增加待修复区域局部软组织体积的重要手段,现已被广泛应用于组织器官修复重建、丰胸、丰臀、面部脂肪填充除皱、颞部(太阳穴)凹陷、面颊部凹陷、双侧面部不对称,甚至是乳腺癌病人术后乳房重建及其他相关术式[1-3],且具备生物相容性好、获取简便、来源广泛、填充效果好和创伤小等显著优势,是目前公认较为安全和有效的手术方法[4-6]。但高吸收率、低存活率等不足[7],限制了该技术的进一步应用和推广。因此脂肪移植手术的关键就是提高自体移植脂肪成活率。脂肪干细胞(Adipose-derived Stem Cells,ADSCs)是一种来源于脂肪组织并且具有多向分化潜能和增殖能力的间充质干细胞。目前已有研究证实,ADSCs在提高移植脂肪存活率等方面发挥着重要作用。它主要通过促进VEGF、bFGF、MMP-9、PDGF、TGF-β等促血管生成因子的分泌,以及直接分化为新生血管内皮细胞及血管周围细胞,使得移植脂肪能够在受区更快获得血液供应,减少缺血时间[7-10]。ADSCs在提高移植脂肪存活率方面具有较为理想的作用和效果,但是目前我国甚至全世界范围内干细胞的应用仍然面临着诸多瓶颈和障碍,例如干细胞分裂分化不可控的可能、法律法规及社会伦理道德的限制。因此,如何找到一种既能发挥干细胞同样的作用,又不含有完整的干细胞体的解决方案就成为了一个亟需解决的问题。细胞的分泌功能是普遍存在的,同时细胞分泌的因子、囊泡以及信号分子等在微环境调控以及生理改变中都发挥着重要的作用,外泌体(exosomes)也是细胞所分泌的一种盘状囊泡。Exosomes呈盘状,直径30150 nm,它的表面富集胆固醇、神经鞘磷脂、神经酰胺等脂类物质,其内载有蛋白质、mRNA、microRNA等生物信息,在细胞微环境中发挥重要作用[11]。1996年在B淋巴细胞中也发现了exosomes,且这些exosomes有着刺激T细胞的增殖以及抑制肿瘤的生长等重要的生物学活性[12]。随后研究人员们发现除了在体内活细胞,甚至在体外培养的不同类型的细胞中也可以检测到exosomes,多种细胞无论在正常或者病理状态下均可以分泌exosomes[13]。现有体内和体外研究发现,正常细胞来源或干细胞产生的exosomes能起到修复甚至促进再生的作用[14]。在exosomes相关内容研究中,关于exosomes与血管再生方面的研究也是其中重要的一部分。相关研究表明正常祖细胞或间充质干细胞、脐带干细胞来源的exosomes同样含有促血管生成作用的相关介质,包括VEGFA、CXCL8、IL-6、FGF2以及miR-23a等。在皮肤损伤修复、骨组织再生、末端肢体缺血和血管损伤修复在内的领域,已有治疗研究利用exosomes所含促血管生成因子促进病灶区域血供恢复。研究表明exosomes有能力改变包括增生、迁移、内皮细胞的管道构成在内的血管生成步骤以及提高血管生成相关基因表达和相关蛋白的分泌[15-26]。目的:利用人脂肪干细胞来源外泌体的促血管生成作用来提高移植脂肪血供水平,以提高移植脂肪组织的存活率。方法:本研究通过使用水动力设备自体脂肪移植手术中获取的脂肪组织提取ADSCs。第一部分通过经典的差速离心法提取ADSCs来源的exosomes,并通过多种途径和方法加以验证该exosomes来源的可靠性和生物性。同时为了更进一步的分析ADSCs来源exosomes促进脂肪移植血管再生的作用;第二部分计划通过模拟出脂肪移植的过程,在裸鼠背部对称两翼皮下注射移植脂肪组织,进一步探讨ADSCs来源的exosomes对脂肪移植存活率是否有促进作用以及其促进脂肪移植存活率的机制。根据上述的实验结果,我们期望能够得到一种更为安全、有效的提高脂肪移植存活率的方法,从而可以将exosomes广泛的应用于基础研究以及临床实验,为进一步实际运用于临床手术及开发新的医疗技术做铺垫。结果:hADSCs-exosome可通过调节区域内的VEGF等相关表达的水平来影响移植脂肪组织血管生成,以促进移植组织的存活。结论:脂肪干细胞来源外泌体能促进移植脂肪的血管生成,加速移植脂肪组织血管化,促进移植脂肪组织的存活率。