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背景和目的MicroRNA(miRNA)是一类广泛分布在动植物中的高度保守的非编码单链小RNA (nod-coding small RNA),长度大约有19nt～23nt,它的功能是负调控基因表达。目前,随着对miRNA研究的不断深入,发现了其许多未知的功能,包括调节细胞增殖、分化和凋亡,主要是靠调控信号分子的表达实现,这些信号分子包括细胞因子、生长因子、转录因子、促凋亡和抗凋亡因子。通过激活原癌基因的表达以及抑癌基因的突变缺失,从而引起肿瘤的发生发展。因而：miRNA与恶性肿瘤的发生、发展、预后有着密切的关联。而肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)又是我国很常见的恶性肿瘤,其死亡率在各类肿瘤致死率中排名第二。肝细胞癌的发生、发展是多因素、多步骤的一系列复杂过程。所以,寻找肝细胞癌发生、发展的相关基因,了解肝细胞癌的分子遗传学机制从而为肝细胞癌的诊断、治疗提供理论基础为目前的研究热点。miRNA的研究为肝癌的研究提供了一个新的思路和希望。但是迄今为止,肝癌的发生,发展的miRNA相关的分子机制仍不是很清楚,进一步探索肝癌的miRNA分子发生机制对提高肝癌的诊断与治疗水平有很重要的意义,因此本研究拟采用miRNA芯片技术筛选肝癌细胞株SMMC-7721和人胚肝细胞株CCC-HEL-1差异表达的miRNAs,建立其miRNA表达谱,筛选感兴趣的miRNA,为以后的研究提供依据。并探讨其与肝癌的发生发展的关系,以期为阐明肝癌的发生的分子机制提供新的依据。方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721和人胚肝细胞株CCC-HEL-1, Trizol法抽取总的RNA后,紫外吸收测定法在260nm和280nm以及变性琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA的质量和浓度,用的miRCURYTM Array Power Labeling kit分离并Hy3荧光标记miRNA,将Hy3荧光标记的miRNA进行与miRNA芯片杂交反应,洗片后,利用生物芯片扫描仪扫描芯片,将图像信号转换为数字信号,进行数据分析和统计学处理,筛选有统计学意义的差异miRNA,导入Cluster3.0进行聚类分析,并挑选感兴趣的miRNA应用Real time PCR方法进行验证。结果芯片结果显示,以两组细胞株差异表达的miRNAs (P<0.05)以上调或者下调两倍(fold change>2)作为筛选标准。发现SMMC-7721较CCC-HEL-1细胞株差异表达的miRNAs共238个。上调的miRNAs154个,下调的miRNAs有84个。上调4倍(fold change>4)的miRNAs共64个,上调10倍(fold change >10)的miRNAs共24个,由高到低依次为hsa-miR-205,hsa-miR-16,hsa-miR-1 01,hsa-miR-195,hsa-miR-30b,hsa-miR-30e,hsa-miRPlus-E1209,hsa-miR-200a,hsa-m iR-378,hsa-miR-15a,hsa-let-7f,hsa-miR-141,hsa-miR-424,hsa-miR-181a-2*,hsa-miR-24,hsa-miR-30a,hsa-let-7a,hsa-miR-26a,hsa-miR-26a-2*,hsa-miR-130a,hsa-miR-15b, hsa-miR-23a,hsa-miR-27a,hsa-miR-193b,hsa-miRPlus-C1005,其中上调最高的hsa-miR-205上调52倍,下调的miRNAs共84个,下调4倍(fold change>4)的有22个,下调5倍(fold change>5)的有10个,为下调倍数由高到低依次为hsa-miRPlus-E1120, hsa-miRPlus-A1027, hsa-miRPlus-E1012, hsa-miR-608, hsa-miRPlus-F1208, hsa-miRPlus-F1205, hsa-miR-767-3p, hsa-miR-373*, hsa-mi R-769-3p, hsa-miRPlus-E1245,其中的hsa-miRPlus-E1120下调13倍应用Realtime PCR方法检测let-7f在SMMC-7721-1和CCC-HEL-1-4中表达情况,溶解曲线呈单峰,显示引物的特异性良好,结果显示,与CCC-HEL-1细胞株相比,SMMC-7721细胞株中的let-7f表达上调,为上调2.3倍。应用Realtime PCR方法检测miR-205在SMMC-7721-1和CCC-HEL-1-4由表达情况,溶解曲线呈单峰,显示引物的特异性良好,结果显示,与CCC-HEL.1细胞株相比,SMMC-7721细胞株中的miR-205表达上调,为上调2.7倍。结论1、实验结果提示人肝癌细胞株SMMC-7721与人胚肝细胞株CCC-HEL-1存在差异性的,miRNA。建立了其miRNA差异表达谱。为进一步研究差异miRNA提供依据。2、经过Realtime PCR验证,miR-205和let-7f在肝癌细胞株中明显上调。为其功能学检测提供依据。3、hsa-miRPlus-E1120, hsa-miRPlus-A1027, hsa-miRPlus-E1012, hsa-miR-608,等miRNA在肝癌中下调。