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本文通过对DNA指纹技术和PCR扩增微卫星DNA技术在近交系大、小鼠遗传检测中的应用研究，并与生化位点标记分析法进行比较，旨在筛选出具有精确、可靠、特异性好的实验动物遗传检测方法，为建立分子生物学实验动物遗传质量监测技术和标准奠定基础。 1．采用公安部二所自行研制的JL-02多位点探针对5个品系的近交系小鼠和2个品系近交系大鼠进行了DNA指纹分析，经过对同一DNA的反复制作DNA指纹图和同一个体不同组织进行的DNA指纹图制作及对亲代和子代（同品系内和不同品系间杂交）间的DNA指纹图比较。结果表明，不同近交系大、小鼠的DNA指纹图差异很大，而同一品系DNA指纹图基本一致；F1及其父母代的DNA指纹图比较，发现仔代的DNA指纹图带均能在其父母代的DNA指纹图带中找到，而且无其他图带。图谱可供分析的图带多，条带清晰可见，易于判读和具有灵敏性高及丰富的多态性，并具有遗传稳定性和组织稳定性。 2．通过对4家单位提供的BALB／c、C57品系小鼠，1家单位提供的615、DBA／2各一窝（其中母鼠各1只、仔鼠各3只），经提取脑组织DNA，限制性内切酶Hinf Ⅰ酶切，利用JL-02多位点探针Southern杂交技术对其进行了DNA指纹分析。结果显示：在2.0kb-23kb之间均出现了14条以上清晰可见、易于判别的图谱条带。经统计表明同一品系近交系小鼠DNA指纹图带基本一致，其中共有带率（X）0.94—1.0，相似系数（F）0.94—1.0。而不同品系间的F值为0.11，X值为0.11。两个品系同一家系的母鼠与仔鼠所得到的DNA指纹图相一致。 3．实验采用JL-02多位点探针对北京和西安地区较大的7家实验动物生产供应单位的5个BALB／c群，2个BALB／c-nu／nu群，4个C57群，1个CBA／N群和1个DBA／2群近交系小鼠进行了DNA指文图分析，并与常规生化标记分析法进行了比较，结果显示：所产生的DNA指纹图的图带数均在17-22条，具有良好的多态性。生化标记分析中Hbb位点显示异常的BALB／c及BALB／c-nu／nu小鼠与其同群体正常小鼠的DNA指纹图有较大差异，两个体之间的相似系数（F）及共有带率（X）均在0.8以下。完全相同DNA指纹图的概率（P）均在1.3×10-2以下。生化标记分析未见异常的群体内DNA指纹图基本一致，P＞2.2×10-1。DNA指纹图显示不同单位的同一品系间存在一定差异，其相似系数及共有带率均在0.8以下，P＜1.1×10-3。不同品系间DNA指纹图的相似系数及共有带率相差较大，在0.4以下，P=2.7×10-10。BALB／c BALB／c-nu／nu间DNA指纹图的相似系数和共有带率在0.65以下，P值为3.8×10-6。两种方法经比较表明，DNA指纹图在动物遗传检测中比生化标记分析有较大的优势，它不但能确切地反映生化标记分析显示异常动物的遗传变化，而且还检出了生化标记分析未能检出的动物遗传变异，因此更加灵敏。DNA指纹图能反映出动物个体间、群体间及品系间的变异程度、亲缘关系及遗传距离，这是生化标记分析无法比拟的。 4．采用DNA指纹图法对国内已知的7个品系9个近交系大鼠群体进行了分析。结果表明：不同品系之间DNA指纹图差异较大，其平均图带数为16.360±2.178，共有带率为0.061±0.008，相似系数为0.062±0.008，相同DNA指纹图概率为3.691×10-23。同一群体不同个体之间DNA指纹图带的相似系数和共有带率（除SHR（哈）和WKY（哈）小于0.6外），其他均在大于0.9。不同地区同一SHR和同一WKY品系间DNA指纹图存在差异，其相似系数和共有带率均小于0.6。中国农业大学博士学位论文中文摘要!旦旦旦旦旦里旦旦旦旦旦旦旦旦旦5.选取小鼠不同染色体上的16个微卫星位点，通过PCR扩增对国内常用的10个近交系小鼠 进行了微卫星多态性分析。结果表明14个微卫星DNA具有稳定扩增效果，在同一品系不同 个体之间表现单态性;在不同品系之间表现多态性，在每一微卫星位点有2至5个等位基因。 129/Sv与其余品系在14个微卫星位点都表现较高的多态性，TA，与TA:只在DgMit23位点 表现多态性。因此，所筛选的14个微卫星位点（DIMit365、DZMit30、D3Mitsl、DSMit48、 D6Mitl02、D10Mitl80、DllMitl28、D12Mitl47、D14Mitl02、D17Mit36）能够反映近交系 小鼠的品系特异性，具有较高多态性，可快速、经济地对近交系小鼠进行遗传监测.6.实验利用聚合酶链反应（.PCR）扩增技术对国内北京和哈尔滨等4家单位6个品系（SHR、 SHRSP、LEW、RCS、从叹Y和F344）的8个近交系大鼠群体进行了DNA多态性的分析研 究。结果表明9个微卫星位点（位点名称为:PKC、SCNZA、CAI，、MYC、APOC3、THYI、 SMST、AFP、AGT、UCP）具有显著多态性;不同品系个体之间具有多态性;同一群体不同个 体之间除SHR（哈）的SMST位点和WKY（哈）的AGT位点出现一定的差异外，其他均 没有差异;不同地区同一品系不同个体之间也存在一定的差异。说明该方法能有效地对近交 系与杂交系、品系与品系:、品系与亚系加以区分。7.为了解和掌握国内BALB/。小鼠遗传质量状况，验证微卫星标记技术在近交系小鼠遗传检测 中应用的可靠性，本实验应用所筛选的小鼠不同染色体上的14个微卫星位点，通过PcR扩 增对北京、上海、沈?