论文部分内容阅读
目的检测microRNA34a、p53和MDM2在大鼠肺癌发生发展过程中的表达,探讨microRNA34a、p53和MDM2与肺癌发生之间的关系。方法大鼠肺癌模型建立:Wistar大鼠68只,其中60只在左下肺叶支气管灌注含有MCA和DEN的碘油溶液0.1ml,另8只灌注O.1ml碘油作为对照。不同时期进行处死大鼠,制作成石蜡包埋组织块,切片HE染色,镜检并进行诊断分型,采用荧光实时定量PCR方法进行检测microRNA34a的表达情况。用免疫组织化学法检测p53和MDM2的表达情况,利用原位杂交的方法检测p53和MDM2的mRNA情况,并进行分级,用统计软件SPSS17.0进行卡方检验和相关性统计统计分析。结果1.动物模型实验组有48只大鼠发生癌变,诱癌率为80%(48/60),癌变的大鼠标本有多个阶段病变共存,共获取支气管黏膜上皮增生21例,不典型增生13例,原位癌28例,侵袭癌20例,转移癌16例。对照组未见肿瘤发生。2. microRNA34a的表达采用荧光实时定量PCR方法检测microRAN34a,正常组microRNA34a表达为0.825±0.093;癌旁组织组0.172±0.040;原位癌组织0.037±0.034;浸润癌0.019±0.005;转移癌0.003±0.004。实验组与对照组之间存在差异(p<0.01),实验组内存在组内差异(p<0.01)。3.p53基因与其蛋白表达根据半定量评分标准p53基因表达评分为对照组1.04±0.49;癌旁组织组1.96±1.01;癌组织组2.61±1.06;浸润癌组3.05±1.24;转移癌组3.83±1.15。组间方差分析F=30.240,p<0.05,对照组和实验组比较,差异有显著性∽<0.01)。p53蛋白表达:对照组0.79±0.48;癌旁组织组1.92±1.04癌组织组2.57±1.09:浸润癌组2.98±1.48;转移癌组3.48±1.98,组间方差分析F=21.726,p<0.05,对照组与原位癌组、癌旁组织组、浸润癌组和转移癌组差异有显著性(p<0.01)。基因和蛋白的表达具有一致性(Kappa=0.582, p=0.000)4.MDM2基因与其蛋白表达根据半定量评分标准MDM2基因表达评分为对照组1.13±1.10;癌旁组织组1.90±1.03;原位癌组织组3.61±0.73;浸润癌组4.41±1.04;转移癌组5.30±0.54。组间方差分析F=30.670,p<0.05。MDM2蛋白表达:对照组1.10±1.01;癌旁组织组1.96±1.30;癌组织组3.60±0.81;浸润癌组4.08±0.81;转移癌组5.09±0.75,组间方差分析F=26.072,P<0.05。基因和蛋白的表达具有一致性(Pearson’ s r=-0.681,p=0.000)5.microRNA34a.p53和MDM2之间相关性在肺鳞癌组织中,microRNA34a和MDM2mRNA二者呈负相关(Pearson’ s r=-0.681,p=0.000);microRNA34a和MDM2蛋白二者呈负相关(Pearson’ s r=-0.671,p=0.000);microRNA和p53mRNA二者呈负相关(Pearson’ s r=-0.690,p=0.000);microRNA34a和p53蛋白二者呈负相关(Pearson’ s r=-0.634,p.0.000);MDM2蛋白和p53蛋白二者呈正相关(Pearson’ s r=-0.609,p=0.000);MDM2mRNA和p53mRNA二者呈正相关(Pearson’ s r=-0.620,p=0.000).结论1.在肺癌中microRNA34a呈低表达甚至缺失,p53和MDM2呈高表达。microRNA34a与p53和MDM2之间呈负相关,三者与肺癌发生发展具有密切的关系。2.microRNA34a和p53、MDM2三者之间具有一定的内在联系,联合检测有利于肺癌的早期诊断。